[发明专利]一种金黄色葡萄球菌肠毒素A的核酸适配体S3及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种新型的金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)核酸适配体S3及其应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌是引起医院感染及社会感染最常见的致病菌之一。它不仅可以引起感染组织的化脓、坏死和脓肿形成，还可以通过分泌各种外毒素，包括金黄色葡萄球菌肠毒素(SEs)、溶血素、毒素休克综合症毒素1等，导致食物中毒和毒素休克综合征等严重疾病。在美国，由SEs引起的食物中毒占细菌性食物中毒的33％；加拿大则更多，占45％，我国每年发生的此类中毒也较多见，其中SEA是引起食物中毒最常见的毒素。作为一种超抗原，SEA无需经抗原递呈细胞的加工，可直接刺激T淋巴细胞的活化与增殖，从而触发复杂的炎症级联反应，大量产生并释放IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6等细胞因子和炎症介质。此外，SEA理化性质相对稳定，对化学灭活剂、蛋白酶和温度、pH改变均有一定的抵抗力。

治疗SEA引起的食物中毒和毒素休克，临床常采用抗炎、补液等对症支持疗法。最新研究发现，抑制SEA的超抗原活性，在初始阶段阻断炎症级联反应的发生，是治疗SEA相关疾病的有效策略。基于此策略，研制各种多肽药物、抗体药物、疫苗等，已成为的SEA生物技术新药研究的热点。

SEA的检测主要采用免疫学方法，包括沉淀反应、凝集反应、ELISA、固相RIA、生物传感器等，这些方法使用抗体作为SEA检测的识别元件，而抗体的制备存在周期长，步骤繁琐，成本高等不足之处。近年来，以检测SEA基因为目标的分子生物学方法发展较快，但PCR等分子生物学方法仍存在假阳性、假阴性，基因沉没表达等技术难题。因此，研制具有更高灵敏度、经济、简便的SEA检测新技术，对于食品卫生监督、临床金黄色葡萄球菌感染的诊疗等都有重要意义。

适配体又被称为“合成抗体”、“化学抗体”，其化学本质是一条单链寡核酸分子(ssDNA或RNA)折叠成特定三维结构与靶物质高亲和力和高特异性结合。适配体的获得通过指数富集配体的系统进化技术(Systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment,SELEX)的体外筛选过程：首先，体外化学合成一个含有25～60nt随机序列的单链寡核苷酸文库；用文库与靶物质混合，洗掉未与靶物质结合的核酸，收集与靶物质结合的核酸分子；以此核酸分子为模板进行PCR扩增，分离单链寡核苷酸作为下一轮筛选的次级文库。通过重复的筛选与扩增，与靶物质有高亲和力的单链寡核苷酸，即适配体，从非常大的随机文库中被分离出来。

由于单链寡核苷酸分子的三维构象灵活多变，很容易形成与靶物质结合的口袋结构，因此理论上能与任何类型的靶物质结合。核酸适配体还有高亲和力、高特异性、可体外合成、可通过修饰改变其功能及药代动力学特性、无免疫原性等优点。利用适配体的诸多优点，将适配体作为靶物质的识别元件，已开发出各种高灵敏、简便、精准的检测新技术。在新药创制领域，适配体已成为生物技术药物研究的新宠。2005年，抗VEGF适配体新药“Macugen”被FDA批准上市治疗老年性黄斑变性。几十种适配体候选药物正进行临床实验研究。因此，筛选SEA的特异性核酸适配体并建立基于适配体的SEA检验新技术以及开发抗SEA感染新药具有重要的科研、临床和市场价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种无毒性、分子量小且渗透性好的金黄色葡萄球菌肠毒素A的核酸适配体S3及其应用。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种金黄色葡萄球菌肠毒素A的核酸适配体S3，其特征在于：该核酸适配体S3的序列如下所示：

ataccagcttattcaattcccgcctctgagcattattaatgttataccttacggctggag60

atagtaagtgcaatct76

所述核酸适配体S3的二级结构为茎环结构，其分子结构如下：

所述的金黄色葡萄球菌肠毒素A的核酸适配体S3，其特征在于：对核酸适配体S3的5’端或3’端进行FITC、氨基、生物素、地高辛等化学修饰。

所述的金黄色葡萄球菌肠毒素A的核酸适配体S3，其特征在于：对核酸适配体S3做截短或延长或部分碱基替换等结构改造所得到的产物进行FITC、氨基、生物素、地高辛等化学修饰。

所述的金黄色葡萄球菌肠毒素A的核酸适配体S3的应用，其特征在于：在分离富集或分析检测金黄色葡萄球菌肠毒素A中的非疾病诊断和治疗方法应用。