[发明专利]一种嵌合抗原受体hCD87-CAR及载有hCD87-CAR基因结构的慢病毒及质粒及其应用

说明书

本发明涉及肿瘤的细胞免疫治疗，特别涉及一种嵌合抗原受体hCD87‑CAR及载有该基因结构的慢病毒及质粒及其应用。在嵌合抗原受体hCD87‑CAR基因结构中，所述嵌合抗原受体hCD87表达为hCD87scFv；所述hCD87scFv包括或选自下述scFv:(a)包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的scFv；(b)与(a)所示的scFv具有相同功能；(c)与(a)所示的氨基酸序列具有至少90％的一致性的scFv。所述hCD87‑CAR用于修饰T淋巴细胞，修饰后的T细胞(CAR‑T细胞)能用于细胞膜表面CD87阳性的肿瘤的治疗。

技术领域

本发明涉及肿瘤的细胞免疫治疗，特别涉及一种嵌合抗原受体hCD87-CAR及载有该基因结构的慢病毒及质粒及其应用。

背景技术

垂体腺瘤是临床上常见的颅内良性肿瘤之一，在颅内肿瘤发病中占10％-15％。近年来，垂体瘤的发生率呈不断上升的趋势，垂体瘤通常发生于青壮年时期。无激素分泌异常的垂体腺瘤(non-function pituitary adenoma,NFPA)往往局部占位症状重,常导致失明等症状。垂体瘤分泌激素亢进，可导致患者催乳素(prolactin，PRL)，促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)等激素水平的增高，从而引起患者满月脸、向心性肥胖、痤疮、毛发增多、高血压、继发性糖尿病和骨质疏松等症状，特别对于女性患者，可导致流产不孕，月经失调，未孕泌乳等后果，对患者及其家庭带来极大伤害。

对于垂体腺瘤患者，像其它肿瘤患者一样，临床上发现时，患者体内肿瘤细胞已占优势，机体的抗肿瘤免疫功能已失去平衡。在这样的免疫系统微环境下，专职抗原提呈细胞-树突状细胞的功能往往受到不同程度的损害，造成抗原提呈激活T细胞的效率降低，导致攻击肿瘤细胞能力不够，靶向性也不够精准；并且，肿瘤细胞通过低表达或不表达MHC基因的分子逃逸机制，能够逃脱免疫细胞的攻击。这就需要一种在抗肿瘤作用中，不仅能够克服MHC介导的细胞免疫机制缺损，同时具备较强特异性杀伤能力并能够对肿瘤细胞具有精准靶向性的免疫疗法。于是，通过嵌合抗原受体设计的细胞免疫疗法CAR-T应运而生。

CAR-T细胞疗法通过外源基因转导技术，把识别肿瘤相关特异性抗原的单链抗体片段(single—chain antibody fragment，scFv)和T细胞活化序列的融合蛋白表达到T细胞表面，这样scFv通过跨膜区与T细胞胞内的活化增殖信号域偶联，经回输患者体内后大量扩增，能够以非MHC限制性的模式表现出较强的抗肿瘤作用。

发明内容

为了治疗垂体无功能腺瘤、垂体泌乳素腺瘤、垂体促肾上腺激素腺瘤，本发明提供一种嵌合抗原受体hCD87-CAR及载有hCD87-CAR基因结构的慢病毒及质粒及其应用。

本发明利用基因工程获得编码嵌合抗原受体hCD87-CAR的融合基因，将该基因片段插入慢病毒表达载体，包装成慢病毒，感染人T细胞，使T细胞表达该嵌合抗原受体的hCD87scFv。这种嵌合hCD87scFv的T细胞能够识别肿瘤表面的抗原受体hCD87，特异性杀伤hCD87阳性的肿瘤细胞，用于肿瘤的治疗。

在垂体腺瘤细胞膜表面hCD87基因抗原高表达，而人类各正常组织中基因表达谱数据集GSE3526，GSE7307以及TCGA数据库中癌旁组织数据分析则表示，hCD87抗原基因在各正常组织中表达水平极低，几乎与基因芯片背景信号一致这也说明hCD87抗原在垂体腺瘤中具有较好的表达特异性。

本申请采用下述技术方案：

本发明提供一种嵌合抗原受体hCD87-CAR基因结构，所述嵌合抗原受体hCD87表达为hCD87scFv；所述hCD87scFv包括或选自下述scFv:

(a)包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的scFv；

(b)与(a)所示的scFv具有相同功能；