[发明专利]用于从单一植物样品中分离DNA、RNA和蛋白质的方法

说明书

本发明提供了一种用于从单一植物样品中提取和纯化基因组DNA、总RNA和蛋白质的方法，包括步骤：提取液的制备：按照水饱和苯酚：异硫氰酸胍2:1的比例配置成混合液，其后按照2％体积比加入吐温20，加入50mM三羟甲基氨基甲烷,形成混合液；组织样品的粉碎；组织样品的裂解；RNA、蛋白质、DNA样品的制备。本发明对TRIzol试剂中有效成分进行了改良，选取了非离子表明活性剂TWEEN‑20替换阴离子表明活性剂十二烷基肌氨酸钠，十二烷基肌氨酸钠为阴离子表明活性剂与蛋白质结合会对蛋白质的带电荷产出影响，TWEEN‑20与蛋白结合力强，用于防止物质分子疏水间相互作用，确保蛋白的充分溶解和结构稳定。

技术领域

本发明涉及用于分离基因组DNA、总RNA和蛋白质的方法。更具体地，本发明涉及用于从单一植物样品中提取和纯化基因组DNA、总RNA和蛋白质的简单且快速的系统和方法。

背景技术

提取DNA、RNA和蛋白质是分子生物学研究的第一步。随着分子生物学的深入，常常需要对一份样品进行多层次的研究，如：DNA的SNP分析、mRNA的表达量分析以及蛋白质的双向电泳分析等。对许多珍贵植物样品，如：植物突变体等，由于数量少按照传统的方法只能获取到DNA、RNA或蛋白质的一种。此外，不同样品在DNA、RNA和蛋白研究也存在组织差异性，而对实验结果产生影响。建立一套能同步从组织样品中提取DNA、RNA和蛋白的方法有重要实践意义。已报到的试剂中TRIzol试剂具有从同一样品中分离DNA、RNA和蛋白质的功能，但在植物组织样品的分离中存在以下问题：1.DNA分离效果不稳定，在植物样品中分离的量比较少；2.分离的蛋白质纯粹较低，不适用于后续蛋白质组学分析。

植物组织中富含糖类、脂类、色素、酚、醌及其他多种次生代谢产物，这些物质将严重干扰DNA、RNA和蛋白质的纯化。本发明依据TRIzol的基本原理，对其试剂成分进行了改良，提高了分离植物样品的DNA的稳定性，提高了分离蛋白质的纯度，分析表明其分离蛋白质完成适用于后续蛋白质组学分析。

发明内容

本发明提供了用于从单个植物材料中高效、简单地提取基因组DNA、RNA和蛋白质的纯化的方法。

本发明的另一个发明目的是制备一种改良型的TRIzol试剂。

本发明的技术方案是：

一种用于从单一植物样品中提取和纯化基因组DNA、总RNA和蛋白质的方法，所述方法包括步骤：

①.提取液的制备：按照水饱和苯酚:异硫氰酸胍＝2:1(V/W)的比例配置成混合液，其后按照2％体积比加入吐温20，加入50mM三羟甲基氨基甲烷,使用HCl调节pH7，形成混合液A；

②.组织样品的粉碎

取植物组织样品0.5g，放入灭菌并预冷的研钵中，并加入约50mg PVPP混合，液氮研磨成细粉，将粉末转入离心管；

③.组织样品的裂解

向离心管中加入5ml混合液A，上下混匀10-15s，室温放置5min；按0.2ml氯仿/ml混合液A加入氯仿，按照2％(w/v)DTT,轻微振荡10-15s，室温放置3-4min；在4℃，8000×g条件下离心15min；

离心后混合物分为三层，移取上层水相a至新离心管，用于后续RNA制备；取下层酚相b至另外一个离心管，用于蛋白质提取；剩余部分c用于DNA制备。

④.RNA样品制备

取所述水相a到新离心管，按照0.5ml异丙醇/ml混合液a加入异丙醇，混匀，室温放置5-10min；在4℃，12000×g条件下离心10min，弃上清；加入1ml 75％乙醇，经DEPC处理悬浮沉淀，4℃,8000×g条件下离心5min，去上清；室温晾干沉淀，加入适量DEPC处理水溶解RNA，-80℃冰箱保存；

⑤.蛋白质样品制备