[发明专利]一种桑树青枯病鉴定的特异性引物及其应用有效
| 申请号： | 201510831462.2 | 申请日： | 2015-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN105296479B | 公开（公告）日： | 2018-05-22 |
| 发明（设计）人： | 戴凡炜;唐翠明;罗国庆;王振江 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/689 |
| 代理公司： | 广州知友专利商标代理有限公司 44104 | 代理人： | 宣国华;刘艳丽 |
| 地址： | 510610 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 桑树 青枯病 鉴定 特异性 引物 及其 应用 | ||
1.一种桑树青枯病鉴定的特异性引物，其特征是：由上游引物RS-16S-F和下游引物RS-16S-R组成，所述上游引物RS-16S-F的核苷酸序列如SEQ ID NO：1中所示，所述下游引物RS-16S-R的核苷酸序列如SEQ ID NO：2中所示。
2.一种早期快速鉴定桑树青枯病的方法，其特征是包括以下步骤：
(1)取疑似青枯病桑树的根部，提取该桑树根部的DNA；
(2)以该桑树根部的DNA为模板，利用权利要求1中的桑树青枯病鉴定的特异性引物RS-16S-F/RS-16S-R进行荧光定量qPCR；
(3)记录该桑树根部的DNA的qPCR反应体系的Ct值，当Ct值≤36时，表明有桑树青枯菌的存在，该桑树为发病植株；当Ct值＞36时，表明没有桑树青枯病的存在，该桑树为健康植株。
3.根据权利要求2所述的早期快速鉴定桑树青枯病的方法，其特征是：步骤(1)中采用DNAiso reagent kit试剂盒提取桑树根部的DNA。
4.根据权利要求2所述的早期快速鉴定桑树青枯病的方法，其特征是：步骤(2)中荧光定量qPCR采用Roche LightCycler 480实时荧光PCR仪和SYBR Premix Ex Taq
5.根据权利要求2所述的早期快速鉴定桑树青枯病的方法，其特征是：步骤(2)中荧光定量qPCR的反应体系包括：SYBR Premix Ex TaqⅡ(2×)10.0μL、浓度为10μM的上游引物RS-16S-F 0.8μL、浓度为10μM的下游引物RS-16S-R 0.8μL、模板2.0μL、双蒸水6.4μL。
6.根据权利要求2所述的早期快速鉴定桑树青枯病的方法，其特征是：步骤(2)中荧光定量qPCR的扩增程序为：第一步95℃预变性30s，第二步95℃变性5s，60℃退火30s，72℃延伸15s，45个循环。
7.根据权利要求2所述的早期快速鉴定桑树青枯病的方法，其特征是：步骤(3)中Ct值的确定方式为：选取桑树青枯病菌，配制一组具有浓度梯度的桑树青枯病菌溶液，以该组具有浓度梯度的桑树青枯病菌溶液为模板，利用权利要求1中的桑树青枯病鉴定的特异性引物RS-16S-F/RS-16S-R进行荧光定量qPCR，记录该组具有浓度梯度的桑树青枯病菌溶液的Ct值，建立Ct值与桑树青枯病菌溶液各浓度log值之间的线性关系，将最低浓度的桑树青枯病菌溶液的Ct值作为评判该桑树是否具有桑树青枯病的临界值。
8.根据权利要求7所述的早期快速鉴定桑树青枯病的方法，其特征是：最低浓度的桑树青枯菌溶液的浓度为0.95×10
9.权利要求1所述的桑树青枯病鉴定的特异性引物在制备具有鉴定桑树青枯病功能的药物中的应用。
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