[发明专利]一种红锥离体培养植株再生方法

权利要求书

1.一种红锥离体培养植株再生方法，其特征在于包括以下操作步骤：

(1)根据红锥优树种子生理状态、离体培养的营养需求设计DX基本培养基，该DX基本培养基的配方如下：720mg/L NH₄NO₃、480mg/L KNO₃、600mg/L Ca(NO₃)₂·4H₂O、370mg/LMgSO₄·7H₂O、170mg/L KH₂PO₄、100mg/L KCl、22.3mg/L MnSO₄·4H₂O、8.6mg/L ZnSO₄·7H₂O、6.2mg/L H₃BO₃、0.83mg/L KI、0.25mg/L Na₂MoO₄·2H₂O、0.25mg/L CuSO₄·5H₂O、0.05mg/LNiSO₄· 6H₂O、0.025mg/L CoCl₂、27.8mg/L FeSO₄·7H₂O、37.3mg/L Na₂·EDTA·H₂O、120mg/L Myo-Insitol、2.0mg/L Glycine、0.4mg/L Thiamine·HCl、0.2mg/L Nicotinic·acid、0.2mg/L Pyridoxine·HCl；其pH值为5.8；

(2)外植体准备与处理：将红锥优树种子预先剥去壳斗，在超净工作台上用解剖刀剥去内外种皮，注意保证胚的完整；

(3)外植体表面消毒：将处理好的种子用体积百分比浓度70～75％的酒精浸泡20～30s，倒掉酒精后用无菌水冲洗1～2次，然后加入质量体积百分比浓度0.05～0.1％升汞溶液，浸泡1～2min，其间不断摇动，倒掉升汞溶液再用无菌水冲洗5～6次；

(4)芽诱导：将消毒好的种子接入配制好的诱导分化培养基中进行培养；所述诱导分化培养基是在DX基本培养基中添加6-BA 0.4～1.0mg/L、KT 0.2～0.5mg/L、NAA 0.02～0.2mg/L、蔗糖25～40g/L和卡拉胶8g/L制备而成，其pH值为5.8～6.0；

(5)增殖培养：将诱导培养25～30d，长度大于2cm的芽切下转接到增殖培养基中进行增殖培养；增殖培养20～30d，分化形成新芽丛，将芽高≥ 3cm的幼嫩枝条切割成1.0～1.5cm的茎段转接入新的增殖培养基，增殖倍数为3～4.2倍；经过反复继代增殖培养扩大繁殖；所述增殖培养基是在DX基本培养基中添加6-BA 0.5～2.0mg/L、KT 0.2～0.5mg/L、NAA 0.05～0.2mg/L、蔗糖25～40g/L 和卡拉胶8g/L制备而成，其pH值为5.8～6.0；

(6)生根培养：将在增殖培养基中芽高超过1.5cm的嫩茎切下，接入生根培养基中进行培养，20d后生根率达80～90％；所述生根培养基是在1/2DX基本培养基中添加NAA0.5～1.0mg/L、蔗糖15～20g/L和琼脂6g/L制备而成，其pH值为5.8～6.0；所述1/2DX基本培养基为将DX基本培养基中所含大量元素，包括NH₄NO₃、KNO₃、Ca(NO₃)₂·4H₂O、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄和KCl的用量减半，其余成分不变；

(7)炼苗移栽；

(8)移栽幼苗管理。

2.根据权利要求1所述的一种红锥离体培养植株再生方法，其特征在于：步骤(1)所述DX基本培养基是在121℃条件下灭菌15～20分钟。