[发明专利]杂交瘤细胞株IMI-G12及其产生的新烟碱类农药通用单克隆抗体和应用

说明书

本发明公开了一种杂交瘤细胞株IMI‑G12，其保藏编号为CCTCC NO:C2015179。本发明还同时公开了一种抗6种新烟碱类农药的通用单克隆抗体，它由保藏编号为CCTCC NO:C2015179的杂交瘤细胞株IMI‑G12分泌产生，抗体亚型为重链IgG1和轻链lambda。本发明还同时公开了上述通用单克隆抗体在对吡虫啉、氯噻啉、噻虫胺、啶虫脒、噻虫啉和烯啶虫胺这6种氯代烟碱类农药的多残留快速筛查中的应用。

技术领域

本发明属于小分子化合物的免疫分析快速检测领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株IMI-G12及其产生的抗6种新烟碱类农药的通用单克隆抗体，可用于吡虫啉、氯噻啉、噻虫胺、噻虫啉、啶虫脒和烯啶虫胺这6种氯代烟碱类农药的多残留快速筛查。

背景技术

新烟碱类农药是在烟碱结构研究的基础上，于20世纪80年代起开发、筛选和合成出来的一类新型杀虫剂。它作为激动剂，能选择性作用于昆虫烟碱型乙酰胆碱受体，阻断昆虫中枢神经系统的正常传导，从而致使害虫出现麻痹进而死亡。其不仅具有高效、广谱及良好的根部内吸性、触杀和胃毒作用，而且对哺乳动物毒性较低，对环境相容性较好。此外，由于这类杀虫剂的作用靶标和方式与以往的有机磷、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯类等杀虫剂不同，它们之间不存在靶标交互抗性。因此，新烟碱类农药在杀虫剂市场所占的比例日趋增长，目前已商品化的有吡虫啉、啶虫脒、噻虫啉、烯啶虫胺、噻虫嗪、噻虫胺、呋虫胺和由我国自主研发的氯噻啉共8个品种(图1)。然而，近年来有研究报道了新烟碱类农药对传粉昆虫、鸟类生殖系统和老鼠呼吸系统等方面的负面影响，特别是欧美等国调查发现该类农药对蜜蜂存在巨大的潜在危害。欧盟已于2013年发布报告并建议新烟碱类农药禁止用于由蜜蜂进行授粉的作物。所以，建立新烟碱类农药多残留的快速分析方法尤为重要。

常规的新烟碱类农药残留检测方法有气相、液相色谱及质谱联用等仪器分析法，其灵敏度高、准确性好，但设备条件要求高、前处理复杂，难以满足大批量样品现场快速检测的需求。近些年发展起来的免疫化学分析技术克服了上述不足之处，具有高灵敏度、高特异性、对环境污染小、适于快速检测等优点。迄今，国内外公开报道有关新烟碱类农药的免疫分析方法如酶联免疫分析法都只是针对一个或两个品种，这主要因为采用的是高特异性抗体，即该抗体只能识别一个靶标分析物或者只与其结构高度类似物有部分交叉识别(如氯噻啉抗体对吡虫啉的识别能力最为接近)。若要同时筛查8种新烟碱类农药，则必须进行7-8轮免疫分析测定，这大大增加了检测时间和成本。因此，为实现新烟碱类农药多残留的快速检测，需要获得该类农药的通用抗体来建立合适的新烟碱类农药多残留免疫分析方法。目前国内外有关研制单个新烟碱类农药高特异性抗体的报道已有不少，但有关新烟碱类农药通用抗体及其通用ELISA检测方法尚未见公开报道。

由于免疫细胞库的多样性，淋巴细胞分泌的单抗也是高丰富度的，因此筛选出能同时识别几个结构类似化合物的通用单克隆抗体是可行的。目前有关农药类特异性通用单抗的报道，主要集中在有机磷类、拟除虫菊酯类和三嗪类农药，关于新烟碱类农药的通用抗体制备尚未见公开报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种灵敏度高、类选择性强的可同时检测6种新烟碱类农药的通用单克隆抗体，用于建立灵敏度高、类选择性强的新烟碱类农药多残留免疫分析方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种杂交瘤细胞株IMI-G12，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C2015179，保藏时间2015年10月28号。

该细胞株IMI-G12能分泌产生抗6种新烟碱类农药的通用单克隆抗体，抗体亚型为重链IgG1和轻链lambda。据此建立的间接竞争ELISA法能用于吡虫啉、氯噻啉、噻虫胺、啶虫脒、噻虫啉和烯啶虫胺这6种氯代烟碱类农药的多残留快速筛查(同时筛查)。