[发明专利]一种基于Pt/PdCu‑三维石墨烯标记的电化学免疫传感器的制备及应用

权利要求书

1.一种基于Pt/PdCu纳米立方体-三维石墨烯标记的电化学免疫传感器的制备，其特征在于，包括以下步骤：

（1）Pt/PdCu-三维石墨烯的制备

取1.5 mL、5.7~7.7 mg·mL^-1 PdCl₂溶液，3.2 mL、7.0~9.0 mg·mL^-1氧化石墨烯溶液，10~20 mg CuSO₄·5H₂O，40~60 mg谷氨酸盐置于250 mL烧杯中，再加入35~45 mL乙二醇，超声，磁力搅拌2 h；用7~9 wt% KOH/乙二醇溶液调节pH到13左右；将混合溶液移入50 mL高压反应釜中，160 ˚C条件下加热6~8 h，冷却至室温；

将所得物质移入含有15~25 mg谷氨酸盐，0.9 mL、2.5~3.5 mg·mL^-1 H₂PtCl₆·6H₂O的乙二醇溶液的烧杯中，用7~9 wt% KOH/乙二醇溶液调节pH到13左右，然后移至反应釜，在160 ˚C下反应2.5~3.5 h；

用超纯水洗涤几次，将洗涤后的物质放入冰箱中冷冻结冰，最后用冷冻干燥机干燥得到Pt/PdCu纳米立方体-三维石墨烯；

（2）电化学免疫传感器的制备

①将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

②取6 µL、0.5~1.5 mg·mL^-1 环糊精功能化的石墨烯溶液滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；

③ 滴加6 µL、5~10 µg·mL^-1的肿瘤标志物抗体，晾干后用超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

④ 滴加3 µL质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液，晾干后用超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

⑤ 滴加6 µL、0.0001~30 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原溶液，晾干后用超纯水冲洗电极表面，4℃冰箱中晾干；

⑥ 取6 µL的Pt/PdCu-三维石墨烯二抗标记物溶液，滴涂于电极表面，置于4 ℃冰箱中晾干，制得Pt/PdCu-三维石墨烯构建的免疫传感器；

⑦ 使用电化学工作站连接饱和甘汞电极，铂丝电极，制备的免疫传感器电极，检测底液为10 mL、pH值为7.0的PBS缓冲溶液，用时间-电流法对分析物进行检测，输入电压为-0.4 V，取样间隔 0.1 s，运行时间200 s；

⑧ 当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10 mL的PBS中注入10 μL 5 mol/L的双氧水溶液，然后记录电流变化，根据所得电流强度与肿瘤标志物浓度之间的线性关系，绘制工作曲线。

2.根据权利要求1所述的电化学免疫传感器的制备方法，其中所述的肿瘤标志物选自以下之一：鳞状癌细胞抗原、癌胚抗原、甲胎蛋白、乳腺癌易感基因、卵巢癌糖类抗原、前列腺特异性抗原。