[发明专利]重组人表皮生长因子发酵方法在审
申请号: | 201510843336.9 | 申请日: | 2015-11-26 |
公开(公告)号: | CN105296576A | 公开(公告)日: | 2016-02-03 |
发明(设计)人: | 韦忠明;黄启斌;莫冬海;唐申秀;包能创;秦芳 | 申请(专利权)人: | 桂林华诺威基因药业有限公司 |
主分类号: | C12P21/02 | 分类号: | C12P21/02 |
代理公司: | 桂林市持衡专利商标事务所有限公司 45107 | 代理人: | 汤凌志 |
地址: | 541004 广西壮*** | 国省代码: | 广西;45 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 重组 表皮 生长因子 发酵 方法 | ||
1.重组人表皮生长因子发酵方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)培养基的准备:由以下重量比例成分制成:
所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中的一种;
用磷酸盐缓冲液调pH为5.5-6.5;
所述促进剂采用以下方法制备:
①原料处理:将积雪草和金银花按照等重混合、洗净、干制、粉碎;
②蒸汽爆破处理:将步骤①得到的物料放入蒸汽爆破罐,爆破压力3.0-3.5Mpa,保压时间维持在150-200s;
③蒸馏处理:将步骤②得到的物料放入蒸馏器,在蒸馏器底部,加热燃烧或通入蒸汽,当炙热的蒸气充满在蒸馏器里,水蒸气通过冷凝管,被引入冷凝器内,再通过油水分离器,收集精油;
④高剪切均质机处理:将步骤③得到的精油通过高剪切均质机处理,线速度30-40m/s,时间3-5min,制成纳米乳,并用微孔滤膜过滤除菌得到;
2)发酵、表达:应用2L摇瓶及20L原位灭菌发酵罐培养遗传工程菌株,以1O%培养基接种后,添加诱导剂,30℃培养,控制pH7.0,氧饱和度10-50%,搅拌150-170rpm,罐压0.01378-0.03445MPa,流加甘油至每L湿菌达100-300g后流加甲醇保持其浓度为1%以进行EGF的诱导表达;
3)分离:表达结束,离心分离,收集上清既得重组克隆菌株离心液。
2.根据权利要求1所述的重组人表皮生长因子发酵方法,其特征在于,步骤1)所述培养基由以下重量比例成分制成:
所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中的一种;
用磷酸盐缓冲液调pH为6.0;
所述促进剂采用以下方法制备:
①原料处理:将积雪草和金银花按照等重混合、洗净、干制、粉碎;
②蒸汽爆破处理:将步骤①得到的物料放入蒸汽爆破罐,爆破压力3.0-3.5Mpa,保压时间维持在150-200s;
③蒸馏处理:将步骤②得到的物料放入蒸馏器,在蒸馏器底部,加热燃烧或通入蒸汽,当炙热的蒸气充满在蒸馏器里,水蒸气通过冷凝管,被引入冷凝器内,再通过油水分离器,收集精油;
④高剪切均质机处理:将步骤③得到的精油通过高剪切均质机处理,线速度30-40m/s,时间3-5min,制成纳米乳,并用微孔滤膜过滤除菌得到。
3.根据权利要求1或2所述的重组人表皮生长因子发酵方法,其特征在于:所述积雪草、金银花的使用量,粉碎后的体积相当于蒸汽爆破罐体积的1/4-1/3。
4.根据权利要求1所述的重组人表皮生长因子发酵方法,其特征在于:步骤2)所述诱导剂为甲醇,用量1.2-1.8%。
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