[发明专利]一种抗葡萄球菌的宽谱噬菌体嵌合裂解酶及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种抗葡萄球菌的宽谱噬菌体嵌合裂解酶，其核苷酸序列如Seq ID NO.1所示，氨基酸序列如Seq ID NO.2所示。

2.如权利要求1所述抗葡萄球菌的宽谱噬菌体嵌合裂解酶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）利用嵌合裂解酶AP-LyS1基因与pET32a原核表达载体合成重组表达质粒，pET32a-AP-LyS1，将重组表达质粒导入转化大肠杆菌TOP10感受态细胞，涂布于含有50 μg/ml氨苄青霉素的LB平板，37℃培养过夜，挑取阳性克隆接种于含有50 μg/ml氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃培养过夜后，用质粒提取试剂盒提取重组质粒并进行Nde Ⅰ和Xho Ⅰ双酶鉴定，37℃水浴孵育3 h，1%琼脂糖电泳，同时用pET32a(+)空质粒作为对照；

（2）将双酶切鉴定正确的重组表达质粒导入转化大肠杆菌TOP10感受态细胞，将转化的菌液涂布于含有50 μg/ml氨苄青霉素的LB平板，37℃培养过夜；次日挑取阳性克隆接种于含有50 μg/ml氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃培养过夜，获得重组菌；

（3）将重组菌接种到含50 μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养液中，37℃振荡过夜培养；次日，按1:100比例转接至100mL LB培养基中，37℃振荡培养至OD₆₀₀值为0.3时，加入IPTG至终浓度为0.5mmol/L，20℃诱导20 h；然后收集菌体，超声波破碎细胞，获得纯化后的裂解酶；

（4）将纯化后的裂解酶经去毒素试剂盒进行去毒处理，内处理后毒素≤0.01 EU/μg，即获得所述抗葡萄球菌的宽谱噬菌体嵌合裂解酶。

3.如权利要求1所述抗葡萄球菌的宽谱噬菌体嵌合裂解酶在抑制或杀灭原料乳内葡萄球菌中的应用。

4.如权利要求1所述抗葡萄球菌的宽谱噬菌体嵌合裂解酶在制备防治牛乳房炎药物中的应用。

5.一种含有如权利要求1所述抗葡萄球菌的宽谱噬菌体嵌合裂解酶的药物。