[发明专利]一种载microRNA的石墨烯-金纳米复合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种载microRNA的石墨烯-金纳米复合物，其特征在于，该复合物由里而外由三部分组成：金纳米颗粒、microRNA和石墨烯。

2.根据权利要求1所述的一种载microRNA的石墨烯-金纳米复合物，其特征在于，所述microRNA为miR-193a。

3.权利要求1或2所述的载microRNA的石墨烯-金纳米复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）载microRNA金纳米颗粒的制备：滴加新鲜配制的硼氢化钠、十六烷基三甲基溴化铵和氯金酸到20-100mL水中，在室温下保持20分钟磁力搅拌，得到粒径约3-10nm的金纳米颗粒，用microRNA和金纳米颗粒混合并搅拌30分钟，离心回收上述金纳米颗粒，上清液测OD值，定量microRNA的负载量；

2）载P-gP抗体的氧化石墨烯的制备：将石墨烯和氯化钠以质量比1:50一起碾磨十分钟，将研磨物在水中溶解并过滤，将过滤物用H₂SO₄氧化并搅拌8小时得到混合物1，将1g/mLKMnO₄溶液逐滴加入到上述混合物1中，期间保持反应温度在20℃以下，接下来，先在38℃搅拌30分钟，再在70℃搅拌45分钟得到混合物2，然后加入与混合物2体积比为1:1的水到上述混合物2中，保持在98℃反应30分钟得到混合物3，并逐渐往上述混合物3中加入水和H₂O₂，充分反应后过滤回收得到过滤物，用5%HCl溶解上述过滤物，然后再用双蒸水溶解，得到氧化石墨烯，接着用梯度离心的方法分离面积大小不同的氧化石墨烯，离心2小时得到离心物，然后将离心物在室温下真空干燥，透射电子显微镜观察样本形态，选择边长100nm的氧化石墨烯超声1小时得到溶液，NaOH和氯乙酸加入上述溶液中并且超声2小时，将其上的羟基置换成羧酸得到氧化石墨烯溶液，将定量的P-gP抗体加入到上述氧化石墨烯溶液中，然后加入EDC催化反应，室温下真空干燥，即得到载P-gP抗体的氧化石墨烯；

3）载microRNA的石墨烯-金纳米复合物的制备：将上述载有P-gP抗体的氧化石墨烯添加到壳聚糖溶液中，超声2小时，终产物以2:1体积比与上述载microRNA的金纳米颗粒混合，搅拌过夜，经真空干燥回收后即为最终的载microRNA的氧化石墨烯-金纳米复合物。

4.根据权利要求3所述的一种载microRNA的石墨烯-金纳米复合物的制备方法，其特征在于，所述硼氢化钠浓度为0.5-10mol/L，所述十六烷基三甲基溴化铵浓度为0.2-5mol/L，所述氯金酸浓度为1-20mol/L。

5.根据权利要求3所述的一种载microRNA的石墨烯-金纳米复合物的制备方法，其特征在于，所述梯度离心条件分别为10000转/分钟、20000转/分钟、30000转/分钟、40000转/分钟、50000转/分钟。

6.权利要求1或2所述的一种载microRNA的石墨烯-金纳米复合物在制备靶向诱导耐药卵巢癌细胞凋亡的纳米药物递送系统方面的应用。

7.一种靶向诱导耐药卵巢癌细胞凋亡的纳米药物递送系统，其特征在于，所述纳米药物递送系统包括权利要求1所述的载microRNA的石墨烯-金纳米复合物。