[发明专利]可用于检测与喉癌相关的ESRRG基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了可用于检测与喉癌相关的ESRRG基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用，特点是该试剂盒包括一对ESRRG基因启动子区甲基化特异性扩增引物及一个甲基化特异性测序引物，其中上游引物具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，下游引物具有如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，甲基化特异性测序引物如SEQ ID NO.3所示，优点是该诊断试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对喉癌的检测，检测效率高，针对性强，同时，以ESRRG基因启动子区甲基化为靶点的药物有望成为喉癌辅助诊断、检测和筛选的一种新手段。

技术领域

本发明涉及一种辅助诊断喉癌的检测试剂盒，尤其是涉及一种可用于检测与喉癌相关的ESRRG基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用。

背景技术

喉癌(Laryngeal carcinoma，LC)是头颈部常见的恶性肿瘤之一，其发病率在我国北方地区位于头颈部恶性肿瘤的第一位，在我国南方地区，仅次于鼻咽癌居于第二位：在世界范围内，居于全身恶性肿瘤的第十一位，约占全球每年新发恶性肿瘤的1-2.5%，其中喉鳞状细胞癌约占90％。目前研究表明喉癌的发生发展与生活习惯、环境因素、遗传和表观遗传学等多种复杂的因素相关。近年来，随着人们生活水平的提高，环境因素恶化等影响，我国喉癌的发病率和死亡率增长迅速，而且发病年龄明显提前。由于喉癌的早期症状不明显，病理学活检是其诊断的金标准，确诊时患者多数已进入中、晚期，许多患者在疾病发生的早期没有得到及时的诊断和治疗，对喉癌的治疗和预后带来了极差的影响。尽管近几十年来外科技术和辅助治疗得到不同程度的提高，但是目前喉癌的五年生存率仍未明显增长，原因之一就是目前喉癌发病的分子学机制仍不清楚，早期诊断及治疗不理想。因此，有必要探索具有高敏感性和特异性的分子检测指标，对喉癌患者做到早发现，早诊断，早治疗，提高喉癌患者总体生存率。

雌激素相关受体伽马（estrogen-related receptor gamma，ESRRG) 是雌激素相关受体( Estrogen-related receptors，ERRs) 家族中的一员，定位于染色体1q41（chr1:216676588-217311097），cDNA 全长3.0kb，编码一条长458 氨基酸多肽链。因其尚未发现天然配体，故也称为孤核受体。雌激素相关受体可通过两个锌指结构组成的DNA 结合域，和其它转录因子之间相互作用或结合DNA 序列上的反应元件，调控多种基因的转录，参与细胞增殖、分化、凋亡、胞内信号传导、核内信号信息的交流等过程。最近国内外的一些研究表明，通过上调雌激素相关受体伽马的表达可增加E-钙黏蛋白表达，继而促进间质向上皮转化，并在体内抑制乳腺癌的生长。同样，将雌激素相关受体伽马基因前体进转染入前列腺癌细胞系LnCaP 和DU145，可在体外显著抑制肿瘤增殖和在体内抑制肿瘤形成，表明雌激素相关受体伽马（estrogen-related receptor gamma，ESRRG)在多种肿瘤中起到抑癌基因的作用。但是目前，国内外还没有公开任何关于在喉癌中用于检测雌激素相关受体伽马基因启动子区甲基化程度的检测试剂盒相关研究报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测方便、针对性强、检测准确率高的可用于检测与喉癌相关的ESRRG基因启动子区甲基化程度的试剂盒及其应用，其中基因ESRRG甲基化水平与喉癌的患病率呈正相关，可通过对样品DNA甲基化水平测定辅助诊断喉癌。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种可用于检测与喉癌相关的ESRRG基因启动子区甲基化程度的试剂盒，包括ESRRG基因启动子区的甲基化特异性扩增上游引物、下游引物及其甲基化特异性测序引物，其中所述的甲基化特异性扩增上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示：