[发明专利]一种应用于免疫检测的免疫磁珠及其制备方法

权利要求书

1.一种应用于免疫检测的免疫磁珠的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）带正电的聚乙酰亚胺修饰的聚苯乙烯微球的制备：以聚乙酰亚胺为稳定剂，乙醇为分散介质，偶氮二异丁氰为引发剂，将苯乙烯单体分散聚合为带正电聚乙酰亚胺修饰的聚苯乙烯微球；

（2）带负电的柠檬酸修饰的四氧化三铁磁性纳米粒子的制备：在氮气气氛下，六水氯化铁和四水氯化亚铁溶于去离子水中，高温搅拌下加入氨水，柠檬酸钠水溶液，氮气冷却下制备出带负电柠檬酸修饰的四氧化三铁磁性纳米粒子；

（3）磁性纳米粒子的合成：取步骤（1）的水溶液和步骤（2）的水溶液溶于去离子水中，采用磁力吸附，将吸附的沉淀分散到去离子水中，重复2-3次，加入去离子水，乙醇，氨水，四乙氧基硅烷，室温下反应10-15h，获得PS@ (Fe₃O₄)₃@SiO₂磁性纳米粒子；

（4）免疫磁珠的合成：调节乙醇水溶液的pH至4.5-5.5，加入步骤（3）的产物，加入硅烷偶联剂对其表面改性，室温反应12-24h，溶解到pH为8-9的缓冲溶液中，加入免疫配基生物活性物质，搅拌温育，用pH为7-8的缓冲溶液磁力分离洗涤3次，保留上清液，加入牛血清蛋白或乙醇胺封闭，获得免疫磁珠。

2.根据权利要求1所述的一种应用于免疫检测的免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）的带正电聚乙酰亚胺修饰的聚苯乙烯微球的制备条件为60-70℃下反应20-25h。

3.根据权利要求1所述的一种应用于免疫检测的免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述的步骤（2）中六水氯化铁和四水氯化亚铁摩尔比为2:1。

4.根据权利要求1所述的一种应用于免疫检测的免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述的步骤（3）带负电柠檬酸修饰的四氧化三铁磁性纳米粒子的制备条件为60-100℃，搅拌速度为800-1500r/min。

5.根据权利要求1所述的一种应用于免疫检测的免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述的步骤（4）中的乙醇水溶液中乙醇的体积分数为80%-95%。

6.根据权利要求1所述的一种应用于免疫检测的免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述的步骤（4）中硅烷偶联剂为以下物质中的一种： 3-缩水甘油丙基三甲氧基硅烷、γ-(2,3-环氧丙氧基)丙基三甲氧基硅烷、氨丙基三乙氧基硅烷、氨丙基三甲氧基硅烷。

7.根据权利要求1所述的一种应用于免疫检测的免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述的步骤（4）中的免疫配基为以下物质中的一种：酶、抗体、抗原、DNA、RNA。

8.根据权利要求1所述的一种应用于免疫检测的免疫磁珠的制备方法，其特征在于：所述的制备方法中各步骤的产物均用乙醇清洗2-4次。

9.一种利用权利要求1的制备方法制得的免疫磁珠，其特征在于：其结构为包括有PS@ (Fe₃O₄)₃@SiO₂磁性纳米粒子、以及偶联连接于PS@ (Fe₃O₄)₃@SiO₂磁性纳米粒子外的免疫配基。