[发明专利]一种预测大肠癌细胞对p38MAPK激酶抑制剂敏感性的方法

权利要求书

1.一种预测大肠癌细胞对p38MAPK激酶抑制剂敏感性的方法，其特征在于， 包括应用免疫组化或免疫荧光技术检测大肠癌细胞的PP2AC表达水平，并测算 H-score的步骤；其中，若H-score数值小于100，则判定大肠癌细胞对p38MAPK 激酶抑制剂敏感，若H-score数值大于200，则判定大肠癌细胞对p38MAPK激 酶抑制剂耐药。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，免疫组化操作具体为：

步骤一，切片脱蜡至水：

二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡5-10min，充分脱去石蜡；梯度酒精脱二甲苯：水洗，然后将 片子插到抗原修复盒内，用蒸馏水洗2遍；

步骤二，灭活内源性过氧化物酶：

将步骤一所得切片加入3％过氧化氢使液面覆盖组织10min，用蒸馏水洗2次， 每次3min；

步骤三，抗原修复：

将步骤二所得切片置于柠檬酸缓冲液中微波加热修复，待自然冷却至室温后先用 蒸馏水洗2次，再用PBS洗3次，每次5min；

步骤四，用非免疫血清封闭，孵育：

将步骤三所得切片用吸水纸将组织周围的水分尽量吸尽，用免疫组化笔在组织周 围画一个圈，然后加入血清覆盖组织，放入湿盒室温孵育10-30min，湿盒底部 加入少量的水；

步骤五，一抗孵育：

弃去血清，滴加一抗4℃过夜孵育，第二天复温45min后，用PBS将切片洗3 次，每次5min；

步骤六，二抗孵育：

滴加二抗室温孵育30min，PBS洗3次每次5min；

步骤七，显色反应：

加DAB显色5－10min，浸入纯水终止显色；

步骤八，复染：

苏木素染色，然后使用水冲洗，1％盐酸酒精分化组织颜色变红立即取出放入水 中，水冲洗返蓝，梯度酒精脱水，Ⅰ、Ⅱ二甲苯脱酒精各两分钟，晾干或吹干， 滴加少量的中性树脂取一盖玻片进行封片；

步骤九，H-score测算。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，免疫荧光操作具体为：

步骤一，包埋好的标本用切片机切石蜡切片，经60℃烘片2小时，二甲苯脱蜡， 梯度酒精复水；

步骤二，抗原修复，使用修复液，微波蒸汽2分钟，98度水浴25分钟，冷却25 分钟；

步骤三，PBS洗3次，每次5min；

步骤四，使用10％羊血清封闭60min；

步骤五，一抗4℃孵育过夜；

步骤六，二抗25℃孵育1h；

步骤七，封片及检测，滴加一滴内含DAPI的封片剂封片；

步骤八，H-score测算。