[发明专利]转maroACC基因抗除草剂玉米CC-2的侧翼序列及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于转maroACC基因抗除草剂玉米CC-2的侧翼序列及其应用。

背景技术

玉米是全球种植范围最广、产量最大的谷类作物，居三大粮食(玉米、小麦、水稻)之首。我国是玉米生产和消费大国，播种面积、总产量、消费量仅次于美国，均居世界第二位。近年来，虽然我国玉米发展势头良好，但仍需大量进口，且进口量逐年快速递增。随着工业化、城镇化快速发展和人民生活水平不断提高，我国已进入玉米消费快速增长阶段。从未来发展看，玉米将是我国需求增长最快、也将是增产潜力最大的粮食作物。抓好玉米生产，就抓住了粮食持续稳定发展的关键。挖掘生产潜力、降低生产成本、保持玉米能够基本自给，是确保国家粮食安全的关键。

在我国玉米种植分布极为广泛，而杂草种类及危害也十分复杂，有调查表明:不论是人工除草地块还是出苗前封闭除草地块，100％的田块都有杂草危害，危害严重的杂草有禾本科、苹科、大戟科、寥科和鸭趾草科杂草。农田杂草给玉米生产带来极大的困扰及危害。由于杂草比农作物具有更粗壮的根系；生长能力很强，繁殖快，密度大，数量多，与作物争光、争肥、争水，因此，严重影响作物的产量和质量；许多杂草是农作物病虫害的中间寄主，病菌，害虫因为杂草的存在而繁殖、传播。如稗草、狗尾草、芦苇是稻飞虱、稻瘟病、水稻纹枯病的寄主。据保守估计，我国每年玉米草害面积达667万公顷，严重危害的占20％，每年玉米因杂草危害而减产的损失率达10％以上。同时。杂草还带来了其它方面的危害，如妨碍农事操作，影响人畜健康状况，造成灌溉麻烦，增加生产费用和劳动力等。人工锄草是一种原始而有效的方法，但是效率低且辛苦繁重。在世界上许多地区，特别是发展中国家，防治杂草是农业生产中用工量最多的工作。为了除草，要进行大量的耕、翻、耙、锄、粉等作业，结果加大土壤通透性，使腐殖质减少，并导致土壤冲刷与水土流失。转aroA、igrA、Bar、Gat等抗除草剂基因玉米不但能有效的防治杂草，而且对环境、有益昆虫及人畜等均无不良影响。

近年来，生物技术的迅速发展大大地推动了植物育种研究手段的革新与研究水平的不断提高，植物抗除草剂生物技术育种已开始进入实用化阶段。利用生物技术手段将外源抗除草剂基因导入植物基因组内，打破了植物种属甚至物种之间难以杂交的天然屏障，实现了抗除草剂基因的转移，从而使植物迅速地、定向地获得抗除草剂特性，同时又能保留原有的良好农艺性状。由于草甘膦的广谱灭生性，因此使用草甘膦除草较人工除草防治效果要好且稳定，还能够节省人力和物力，有效的节约社会资源。因此，培育和推广抗草甘膦玉米品种在我国有着广阔的应用前景，将为玉米生产和农民增收提供保障。

转maroACC基因抗除草剂玉米CC-2是中国农业大学将CP4EPSPS基因按照玉米密码子特征进行优化，获得了适合在玉米中高表达的EPSPS基因，优化的基因拥有自主知识产权(ZL201210406176.8)，同时克隆了高粱EPSPS基因的叶绿体信号肽(赵海铭等,《农业生物技术学报》,2013,21(9):1009-1018)，将其与优化的EPSPS基因连接，命名为maroACC。通过基因枪共转化的方法把maroACC基因转入到具有高转化效率的玉米自交系HiIIA和HiIIB的杂交组合中，用草甘膦进行筛选，获得了500余个maroACC蛋白阳性的转化体，通过拷贝数检测及表达量筛选获得的一个优良转化体。在栽培地环境中，转基因玉米CC-2与其对应的非转基因玉米在生育期、株高、产量等方面均一致，可正常生长；在荒地环境中，转基因玉米CC-2及其对应的非转基因玉米与杂草相比不具竞争优势，无杂草化风险(宋新元等.转基因抗除草剂玉米CC-2生存竞争能力研究.作物杂志,2014年06期)。

如今转基因成分检测受到越来越广泛的关注，根据转基因插入片段的旁侧序列设计转化体特异的检测引物是最为有效的检测方法。目前已经有部分专利和文献报道了转基因植物外源插入载体旁侧序列，例如：彭于发等人于2007年利用基因步移和LD-PCR方法分析了水稻品系科丰6号的外源插入片段的旁侧序列，建立了转基因水稻科丰6号的品系特异性检测方法。然而，在对现有的专利和文献的分析中发现，还没有任何关于转maroACC基因抗除草剂玉米CC-2的外源插入片段的旁侧序列的文章和专利报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于检测或辅助检测待测玉米是否为转maroACC基因抗除草剂玉米CC-2的引物对或引物对组。

本发明所提供的引物对具体为引物对1或引物对2。