[发明专利]一种雪落樱组培快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物无性繁殖技术领域，尤其涉及一种雪落樱组培快速繁殖方法。

背景技术

带芽茎段是目前使用最多的离体快繁外植体，众多试验表明樱花以茎段或芽心为外植体时可成功的诱导出丛生芽。愈伤培养是组织培养中非常常见并且也是重要的环节。任何外植体均可以通过愈伤组织培养诱导出芽和根。当外植体为叶片、叶柄、花瓣、花柄、子房等只能通过愈伤组织途径培养，很难直接诱导出丛芽，这可能与外植体的基因型、生理状态、生长调节剂配比、培养条件、继代周期等方面有关，仍需要进一步深入研究。尤其是褐化、污染、玻璃化是组织培养再生体系建立过程中常见的问题。

雪落樱（CerasusxueluoensisC.H.Nan&X.R.Wang）为蔷薇科樱属矮生樱亚属新种，具有极大的观赏价值，但目前存在繁殖障碍，市场无商品苗提供。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种雪落樱组培快速繁殖方法，建立雪落樱的再生体系，获得优质的雪落樱种苗。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种雪落樱组培快速繁殖方法，包括以下步骤：

1）剪取春季雪落樱幼嫩的茎段，消毒洗净，剪成带芽茎段，放入配方为1/4MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L+6.4g/L琼脂+30g/L蔗糖的培养基中，培养一周后诱导出丛芽；

2）将生长健壮的丛芽块放入配方为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+TDZ0.1mg/L+6.4g/L琼脂+30g/L蔗糖的培养基中培养，每25d继代一次直至培养出小苗；

3）将小苗培养在壮苗培养基MS+6-BA0.1mg/L+IBA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.4g/L中，当单个不定芽生长到1.5~3cm规格时，转入生根培养基3/4MS+NAA0.1mg/L+蔗糖15g/L+琼脂6.4g/L中，生根培养40d；

4）将生长健壮的苗子在培养室中炼苗3~5d，清洗干净根系间的培养基进行移栽，移栽后适当遮阴，保持湿度，移栽成活。

一种雪落樱组培快速繁殖方法，包括以下步骤：

1）取幼嫩叶片，消毒洗净，剪成小叶片放入配方为MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L+2,4-D2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.4g/L的培养基中培养，每25天继代一次直至培养出愈伤组织；

2）将愈伤组织放入丛芽增殖培养基MS+6-BA0.5~2.0mg/L+NAA0.05~0.2mg/L+TDZ0.1~1.0mg/L+Vc20mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.4g/L中培养，每25d继代一次直至培养出小苗；

3）将小苗培养在配方为MS+6-BA0.05~0.1mg/L+IBA0.01~0.1mg/L的壮苗培养基中，当单个不定芽生长到1.5~3cm时，然后转入配方为3/4MS+NAA0.1mg/L+蔗糖15g/L+琼脂6.4g/L的培养基中，进行生根培养40d；

4）将生长健壮的苗子在培养室中炼苗3~5d，清洗干净根系间的培养基进行移栽，移栽后适当遮阴，保持湿度，移栽成活。

步骤2）中，丛芽增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+TDZ0.1mg/L+Vc20mg/L+琼脂6.4g/L+蔗糖30g/L。

步骤1）中，消毒洗净的方法为：用洗洁精浸泡2~4min，用软毛刷轻轻刷除茎段表面的污染物，再于流水下冲洗1~3h；茎段以75%的酒精30s，用无菌水清洗3~5次，然后0.1%HgCl₂10min，用无菌水清洗5~8次。

步骤3）中，壮苗培养基配方为：MS+6-BA0.1mg/L+IBA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.4g/L。

有益效果：与现有的技术相比，本发明的雪落樱组培快速繁殖方法，有效建立出雪落樱的再生体系，能快速高效的获得优质种苗，解决了实生苗生长周期长的问题，为工厂化育苗缩短了时间、提高了效率、降低了成本，同时保留了母本的优良性状。研究中发现丛芽诱导效率较高为95.38%、增殖量大，愈伤组织的诱导与分化成功实现了无菌苗的大量培育，得出了较佳的培育体系；胚性愈伤组织的诱导及分化初探也得出了较为理想的胚状体。

附图说明

图1是茎段培养培养图；

图2是生根图；