[发明专利]一种以蓝藻沼液为基质发酵Bt的方法在审
| 申请号： | 201510865971.7 | 申请日： | 2015-12-01 |
| 公开（公告）号： | CN105296403A | 公开（公告）日： | 2016-02-03 |
| 发明（设计）人： | 张乃明;谭超;秦太峰;包立 | 申请（专利权）人： | 云南农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/07 |
| 代理公司： | 昆明今威专利商标代理有限公司 53115 | 代理人： | 杨宏珍 |
| 地址： | 650201 云南省昆明市*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 蓝藻 基质 发酵 bt 方法 | ||
1.一种本发明的以蓝藻沼液为基质发酵Bt的方法，其特征在于方法的该具体步骤如下：
(1)原料选择
成分及质量百分比为：微囊藻属93.12％，鱼腥藻属1.66％，束丝藻属1.72％，绿藻门2.99％，硅藻门0.51％的新鲜蓝藻；
菌种标准编号：FSCC(T)115030，GIMCC编号：GIM1.32的苏云金芽胞杆菌(Bacillusthuringiensis)；
常规的LB液体培养基：胰蛋白胨：40％，酵母提取物：20％，氯化钠40％；或含固率1-3％的常规的蓝藻沼液培养基；
(2)蓝藻沼液制备
用10-25L不锈钢厌氧发酵罐，加入占罐容积20-50％的蓝藻藻泥，排氧温度30℃下自然发酵发酵2个月；
(3)BtGIM1.32菌种活化
在250-500mL锥形瓶中装入配置好的100-200mL常规LB液体培养基并在103.4kPa，121.3℃下灭菌15min，无菌操作台上用浸过70-80％的酒精脱脂棉擦净菌种冻干管，用火焰加热顶部，滴无菌水使冻干管顶端破裂，用镊子敲破冻干管，取50-150mg菌种置于LB液体培养基中，在温度25-35℃、50-150rpm/min的条件下培养活化5-20h；用无菌膜封口后放入2℃冰箱冷藏备用；
(4)发酵
在0.5-1L锥形瓶中加入100-300mLLB培养基或含固率1-3％的蓝藻沼液培养基并在103.4kPa，121.3℃下灭菌15min，每瓶接种1-3％已活化的pH值为5.0-8.0的BtGIM1.32，在温度25-35℃、50-150rpm/min的条件下培养发酵40-60h；
(5)干燥
采用-55℃，4Pa常规真空冷冻干燥法对上述发酵脱水处理，当含水率小于质量百分比5％时即得到发酵Bt原粉。
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