[发明专利]针对黄曲霉毒素的纳米抗体

说明书

技术领域

本发明涉及单域重链抗体技术(又称纳米抗体技术)，以及基因工程抗体技术，特别是针对黄曲霉毒素的单域重链抗体或多肽。

技术背景

黄曲霉毒素(Aflatoxin)是由黄曲霉(Aspergillusflavus)、寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)、集蜂曲霉(Aspergillusnomius)和溜曲霉(Aspergillustamarii)等真菌产生的次级代谢产物，具有强致癌性和强免疫抑制性。黄曲霉毒素是一类化学结构类似的二呋喃香豆素衍生物，主要包括黄曲霉毒素B₁(AFB₁)、B₂(AFB₂)、G₁(AFG₁)、G₂(AFG₁)和M₁(AFM₁)等。在已发现的黄曲霉毒素中，黄曲霉毒素B₁的毒性最强，被世界卫生组织的癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物。产毒真菌菌株广泛存在于自然界中，粮食油料等农产品在生产、加工以及储藏等过程中均可能受到污染，导致黄曲霉毒素超标。我国是黄曲霉毒素污染情况较为严重的地区。因此，开发稳定、快速、高灵敏、高通量的黄曲霉毒素检测方法，对于保障我国食品安全、减少由此带来的损失具有重要意义。

现有的黄曲霉毒素检测方法主要有免疫分析法、仪器分析法以及薄层层析法。其中免疫分析法可避免其它两类方法存在的一些缺陷，具有灵敏度高、成本低以及可现场检测等优点。免疫分析法的原理是基于抗原抗体的特异性识别，抗体的性能是免疫分析方法灵敏度、准确度等指标的决定性因素。因此获得针对黄曲霉毒素的抗体是建立相关免疫学检测技术的前提和关键。

单域重链抗体(又称纳米抗体)是由羊驼重链抗体的可变区组成，又称为纳米抗体，具有耐酸碱、耐高温以及易于生产等特性。这些特性对于黄曲霉毒素的低成本、可重复使用的免疫学检测方法有重要的实用价值。

发明内容

本发明的目的是提供针对黄曲霉毒素的单域重链抗体，可以被用于制备检测黄曲霉毒素的试剂和工具。

本发明提供一个针对黄曲霉毒素的单域重链抗体(即本发明针对黄曲霉毒素的纳米抗体，下同)，具有SEQIDNO.:1、SEQIDNO.:3、SEQIDNO.:5、SEQIDNO.:7、SEQIDNO.:9、SEQIDNO.:11、SEQIDNO.:13所示的氨基酸序列。

其氨基酸序列的IMGT编号和结构域的划分包括四个框架区(Frameworkregion,FR)和三个互补决定区(Complementarity-determiningregion,CDR)。

本发明提供一个核酸分子，其特征是编码SEQIDNO.:1，通过遗传密码子可以随时获得该核酸分子的具体序列。

本发明还提供一个核酸分子，其特征是编码SEQIDNO.:1、SEQIDNO.:3、SEQIDNO.:5、SEQIDNO.:7、SEQIDNO.:9、SEQIDNO.:11、SEQIDNO.:13部分结构域，通过遗传密码子可以随时获得该核酸分子的具体序列。对应的，可以为SEQIDNO.:2、SEQIDNO.:4、SEQIDNO.:6、SEQIDNO.:8、SEQIDNO.:10、SEQIDNO.:12、SEQIDNO.:14核酸分子。

本发明所提供的核苷酸序列或者至少部分序列可以通过合适的表达系统进行表达以得到相应的蛋白质或多肽。这些表达系统包括细菌，酵母菌，丝状真菌，动物细胞，昆虫细胞，植物细胞，或无细胞表达系统。

本发明还提供一种载体，包含所述核酸序列。由于遗传密码子具有简并性，该核酸序列可以根据不同的应用目的而不同。

本发明还提供一种宿主细胞，包括所述蛋白质或表达载体。

本发明还提供一种检测黄曲霉毒素的方法，含有本发明所述针对黄曲霉毒素的单域重链抗体。基于本发明提供的针对黄曲霉毒素的单域重链抗体与黄曲霉毒素特异性结合的能力，建立黄曲霉毒素的检测方法。其中，优选的方法包括酶连免疫吸附法(Enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)，荧光免疫法(Fluoroimmunoassay,FIA)，免疫芯片法，亲和层析法和免疫层析法等。