[发明专利]用于AChE的组合物、筛选AChE抑制剂方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学检测领域，具体涉及一种用于乙酰胆碱酯酶(AChE)的组合物、筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂的方法和用途。

背景技术

AChE(乙酰胆碱酯酶)是一种可以在胆碱神经突触催化分解乙酰胆碱的酶，使突触传递终止。很多研究已证实AD小鼠脑脊液中AChE水平显著降低，低水平的AChE与一定程度的认知障碍显著相关。小鼠脑脊液中低水平AChE可能表明大脑处于风险或者个体正处于AD的临床症状前阶段。由于现有的AD确诊不仅需要存在严重的认知功能缺损，而且需要证实存在典型的脑组织病理学改变，这些信息对于早期阻断和治疗疾病就非常有用。现在尚无准确的方法在早期无症状阶段识别AD，越来越多的证据表明，使用脑脊液(CSF)生物标记物本身(β-淀粉样蛋白，全蛋白和磷酸化tau蛋白水平)或者与神经影像学结合，可为AD的临床诊断提供有效的信息。CSF中AChE的水平与AD认知进程的相关性，可以作为一个重要的参数应用于监测AD进程和治疗效果，尤其是同时结合其他CSF生物标记物和神经影像学检查。因此开发可靠的方法来检测CSF中AChE的水平十分重要。

传统方法检测AChE水平包括使用Ellman试剂的比色法，和检测乙酰胆碱酯酶氧化胆碱产生的过氧化氢，这两个方法均灵敏度低且需要大量时间。为了提高灵敏度，增强的化学方法，如基于有机化合物和量子点的电化学探针和化学发光或者荧光检测AChE，起到了重要作用。然而这些方法仍然灵敏度较低且需要繁琐的化学合成步骤。

已报道两种基于AuNP(纳米金)比色法检测AChE，一种是基于AuNP的聚集，会导致红色吸收带的红移，以及从红色到蓝色的颜色变化；另一种依赖于AChE催化的单分散AuNPs尺寸的扩大。然而，研究者仍然面临提高试验灵敏度和准确性的挑战，更重要的是，没有报道评估它们在实际复杂混合物样品，如CSF或血清分析中的应用。因此，开发具有高灵敏度和特异性的检测AChE实际样本方法有很大需求。

发明内容

本发明需要解决的现有技术的问题是：现有的用于乙酰胆碱酯酶分析以及筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂的方法，其灵敏度和准确性较低且需要繁琐的化学反应步骤，而且不合适应用于复杂的样品中。

为了解决上述问题，本发明提供了一种乙酰胆碱酯酶分析用的组合物、用于筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂的方法以及用途。

具体而言，本发明提供了一种乙酰胆碱酯酶分析用的组合物，包括罗丹明素、纳米金和乙酰胆碱酯酶的作用底物。

优选的，所述的罗丹明素、所述纳米金以及所述乙酰胆碱酯酶的作用底物的摩尔比为：800～1800:5：10000～40000，优选摩尔比为1000～1600：5:10000～30000，更优选摩尔比为1000～1400：5:15000～20000。

优选的，所述的纳米金为柠檬酸修饰的纳米金。

优选的，所述的纳米金的粒径大小为10nm～80nm，优选为10～40nm，更优选为13～20nm。

优选的，所述乙酰胆碱酯酶的作用底物为碳数子数为2-6个的羧酸酰化的胆碱类化合物及其类似物；优选为乙酰胆碱及其类似物，丙酰胆碱及其类似物，丁酰胆碱及其类似物；更优选为乙酰胆碱及其类似物。

其中，本发明中的乙酰胆碱酯酶可以作用于乙酰胆碱酯酶的作用底物，特异性的断开乙酰胆碱酯酶作用底物中的酯键，生成碳原子数为2-6个的羧酸和胆碱类化合物或者其类似物。

优选的，所述的碳数子数为2-6的羧酸酰化的胆碱类化合物的类似物为碳数子数为2-6个的羧酸酰化的胆碱类含盐类似物或者碳原子数为2-6个的羧酸酰化的胆碱类受体类似物；优选为乙酰胆碱含盐类似物，乙酰胆碱受体类似物，丙酰胆碱含盐类似物，丙酰胆碱受体类似物，丁酰胆碱含盐类似物，丁酰胆碱受体类似物；更优选为乙酰胆碱含盐类似物或乙酰胆碱受体类似物；进一步优选为乙酰胆碱含磷类似物。

优选的，所述组合物为含有罗丹明素、纳米金和乙酰胆碱酯酶的作用底物的缓冲溶液。

优选的，所述的缓冲溶液的pH值为9.0-11.0，优选pH值为10.0，更优选为碳酸氢钠-氢氧化钠的缓冲溶液。

本发明同时提供了一种用于筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂的方法，包括如下步骤：

(1)将样本置于含有罗丹明素、纳米金、乙酰胆碱酯酶的作用底物的溶液中反应；

(2)利用紫外吸收的方法，测定溶液的吸收值；

以及

(3)采用荧光检测，测定溶液的荧光值。

优选的，所述的紫外吸收检测波长范围为400～800nm。