[发明专利]一种检测饲料中抗生素残留的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测饲料中抗生素残留的方法。

背景技术

在动物饲料中添加少量的抗生素能够有效预防动物疾病，并且，某些抗生素还能够促进动物生长。但如果食用过量的抗生素就会容易在动物体内产生残留，从而影响到动物食品的安全性。因此，目前很多国家都严格规定了饲料中抗生素的使用剂量，同时还对使用抗生素的种类作了限制。我国农业部发布了《允许作饲料药物添加剂兽药品种及使用规定》，允许用作饲料添加剂的抗生素品种有15种，并分别对适用动物、最低用量、最高用量及停药期作了严格规定，但由于兽药管理工作跟不上，实际生产中抗生素的使用品种比规定要多，使用量普遍也较大，而且基本没有执行停药期，特别在蛋鸡的产蛋期，按要求是严格限制使用抗生素的，但据了解，在产蛋期使用抗生素是普遍存在的。因此，对饲料进行抗生素残留检测对保证食品安全具有重要意义。

目前，对抗生素残留检测主要有酶联免疫法和高效液相色谱法。这些检测方法都涉及到样品前处理步骤，需要从饲料中提取出抗生素。由于饲料中含有膳食纤维、脂肪、糖类等成分，萃取时有机相与水相的界面不清，乳化状态很严重。采用常规的化学试剂并不能完全萃取出其中的抗生素成分，从而造成检测结果的准确度不高。

发明内容

本发明的目的是针对上述背景技术中存在的某些和某个问题，提供一种检测饲料中抗生素残留的方法。

根据本发明的检测饲料中抗生素残留的方法，包括以下步骤：

(1)利用粉碎机将饲料加水制成匀浆液，称取3-5g匀浆液于离心管中，加入0.3-0.5g的破乳剂，超声振荡15-30分钟后，加入10-20mL甲醇，分散均匀后，加入10-30mL的磷酸盐缓冲溶液，超声提取10-20分钟，离心后，移取5mL上清液，加5mL磷酸盐缓冲溶液混匀后，待净化；

(2)将步骤(1)中的待净化液转移至固相萃取柱中，依次用5mL水，5mL甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液。在50℃水浴中用氮气吹至近干，加入5mL乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过微孔滤膜后滤液待测；

(3)用液相色谱-串联质谱法测定和确证，外标法定量。

破乳剂是一种表面活性物质，它能使乳化状的液体结构破坏，以达到乳化液中各相分离开来的目的。破乳剂可以是化学破乳剂，例如聚氧乙烯聚氧丙烯聚醚或聚氧乙烯聚氧丙烯十八醇醚；也可以是生物破乳剂，例如含芽孢杆菌的生物破乳剂。化学破乳剂成本低、保质期长。生物破乳剂需冷冻保存，但破乳效果通常要优于化学破乳剂。

在本发明的检测方法中，在样品前处理步骤中，加入一定量的破乳剂来消除乳化现象，促使饲料中的膳食纤维、脂肪、糖类与抗生素有效分离，提高样品中抗生素的溶出率。再与合适的萃取剂配合，在合适的pH值条件下，提取出饲料中的抗生素。从而在源头上保证了最终检测结果的准确性。

根据本发明的检测饲料中抗生素残留的方法，能够有效提高检测结果的准确性，为食品安全提供有益保障。

具体实施方式

下面通过具体实施例详细描述检测饲料中抗生素残留的方法。本领域技术人员应当理解，下面描述的实施例仅是对本发明的示例性说明，而非用于对其作出任何限制。

以经初步筛查(例如微生物抑制试纸法)含有抗生素的鸡饲料为样品，检测其5种磺胺类抗生素药物(磺胺二甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺对甲基嘧啶、磺胺甲基异噁磺胺喹噁啉)残留的具体含量，来介绍本发明的实施过程和效果。

1.样品液A制备

1.1提取步骤

利用粉碎机将鸡饲料加水制成匀浆液，称取5g匀浆液于离心管中，加入0.3g的聚氧乙烯聚氧丙烯聚醚，超声振荡30分钟后，加入20mL甲醇，分散均匀后，加入30mL的磷酸盐缓冲溶液，超声提取20分钟，经7000r/min离心10分钟后，移取5mL上清液，加5mL磷酸盐缓冲溶液混匀后，待净化；

1.2纯化步骤

将步骤1.1中的待净化液转移至HLB固相萃取柱中，依次用5mL水，5mL甲醇水溶液淋洗，弃去流出液，减压抽干后，用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液。在50℃水浴中用氮气吹至近干，加入5.0mL乙腈水溶液，在涡旋混合器上混合后，过0.22微米的微孔滤膜后滤液待测。

上述步骤中，磷酸盐缓冲溶液浓度为0.1mol/L，制备过程为：溶解12.2g磷酸二氢钠于950mL水中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至8.0，最后用水稀释至1L。甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为3:7。乙腈水溶液中乙腈与水体积比为2:8。

2.样品液B制备