[发明专利]光学活性的β-羟基酯类化合物的制备方法及其中间体

权利要求书

1.一种光学活性的β-羟基酯类化合物(2S,3R)-2-胺甲基-3-氨基丁酸甲酯(5-1)的制备方法，其特征在于，其包括下列步骤：水中，在pH值为8.0-9.5的条件下，在青霉素酰化酶的作用下，将化合物(4-1)进行水解反应，制得化合物(5-1)；

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，化合物(5-1)的制备方法包括下列步骤：在pH值为8.0-9.5的条件下，将化合物(4-1)和水的混合液，与青霉素酰化酶混合，进行所述的水解反应，制得化合物(5-1)。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，

所述的青霉素酰化酶为青霉素G酰化酶；

和/或，所述的青霉素酰化酶与化合物(4-1)的质量比为1:25-1:60；

和/或，所述的水解反应的温度为20℃-50℃；

和/或，所述的水解反应的时间为6小时-24小时；

和/或，所述的化合物(5-1)的制备方法中，以碱性物质控制反应体系的pH值在8.0-9.5之间；所述的碱性物质为磷酸氢二钾水溶液；所述的磷酸氢二钾水溶液的摩尔浓度为0.05mol/L-0.2mol/L。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，

所述的青霉素酰化酶为固定化青霉素G酰化酶；

和/或，所述的青霉素酰化酶与化合物(4-1)的质量比为1:30-1:50；

和/或，所述的水解反应的温度为30℃-45℃；

和/或，所述的水解反应的时间为8-12小时。

5.如权利要求1-4任一项所述的制备方法，其特征在于，所述的(2S,3R)-2-胺甲基-3-氨基丁酸甲酯(5-1)的制备方法还进一步包含下列步骤：溶剂中，pH值为6.0-9.0的条件下，在氢供体和辅酶因子存在的条件下，在羰基还原酶的作用下，将3-氧代-2-(2-苯乙酰胺甲基)丁酸甲酯(2-2)进行如下所示的催化还原反应，制得所述的(2S,3R)-2-(2-苯乙酰胺甲基)-3-羟基丁酸甲酯(4-1)；

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，

所述的羰基还原酶为克菲尔乳杆菌(Lactobacillus kefir)来源的羰基还原酶的突变体；所述的克菲尔乳杆菌来源的羰基还原酶的突变体的氨基酸序列如申请公布号为CN101883846A的中国专利申请中公开的克菲尔乳杆菌来源羰基还原酶突变体中序列表SEQNOID：6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60或62所示；所述的羰基还原酶存在于重组表达该羰基还原酶的基因工程大肠杆菌诱导表达后的菌体细胞破碎液中；所述的重组表达该羰基还原酶的基因工程大肠杆菌诱导表达后的菌体细胞破碎液的制备方法包括下列步骤：将所述的重组表达该羰基还原酶的基因工程大肠杆菌诱导表达后的发酵液，进行离心得到菌体后与水混合，采用超声波进行细胞破碎，即可；所述的重组表达该羰基还原酶的基因工程大肠杆菌诱导表达后的菌体细胞破碎液与化合物(2-2)的体积质量比为1mL/g-100mL/g；

和/或，化合物(4-1)的制备方法中，所述的溶剂为水和异丙醇的混合溶剂；所述的水和异丙醇的混合溶剂中，水和异丙醇的体积比为3:1-4:1；

和/或，所述的氢供体为异丙醇；

和/或，所述的辅酶因子为NaNADP；

和/或，所述的辅酶因子与溶剂的质量体积比为0.001g/L-0.1g/L；

和/或，所述的催化还原反应的温度为20℃-45℃；

和/或，化合物(4-1)的制备方法中，以碱性物质控制反应体系的pH值在6.0-9.0之间；所述的碱性物质为氢氧化钠水溶液或氨水。