[发明专利]一种血小板生成素或其变体或衍生物的纯化方法有效
| 申请号： | 201510869984.1 | 申请日： | 2015-12-01 |
| 公开（公告）号： | CN105541994B | 公开（公告）日： | 2019-12-06 |
| 发明（设计）人： | 娄竞;张波;苏冬梅;靳征 | 申请（专利权）人： | 沈阳三生制药有限责任公司 |
| 主分类号： | C07K14/52 | 分类号： | C07K14/52;C07K1/18;C07K1/20 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 110027 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 血小板 生成 变体 衍生物 纯化 方法 | ||
1.一种血小板生成素的纯化方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
(1)将填料为含羧甲基的琼脂糖的阳离子交换层析柱用pH6.0±0.2的柠檬酸缓冲液平衡，待纯化的血小板生成素上样后用pH6.0±0.2的柠檬酸缓冲液平衡，用pH6.0±0.2的含有0.1mol/L NaCl的柠檬酸缓冲液洗脱杂蛋白，再用pH6.0±0.2的含有0.25mol/L NaCl的柠檬酸缓冲液洗脱目的蛋白；
(2)将填料为含季胺基的琼脂糖的阴离子层析a柱用pH7.0±0.2的Tris·HCl缓冲液平衡，将步骤(1)活性峰上样后用pH7.0±0.2的Tris·HCl缓冲液平衡，接着用pH4.5±0.5、电导率4.0±1.0mS/cm的含有0.04mol/L NaCl的6mol/L尿素溶液洗脱杂蛋白，然后用pH7.0±0.2、电导率6.0±1.0mS/cm的含有0.04mol/L NaCl的Tris·HCl缓冲液洗脱尿素，最后用pH7.0±0.2、电导率16.0±2.0mS/cm的含有0.15mol/L NaCl的Tris·HCl洗脱目的蛋白；
(3)将填料为C4的反相层析柱用pH6.5±0.2的含有5％异丙醇的Tris·HCl缓冲液平衡，将步骤(2)活性峰上样后用pH6.5±0.2的含有5％异丙醇的Tris·HCl缓冲液平衡，先用pH6.5±0.2的含有40％异丙醇的Tris·HCl缓冲液洗脱杂蛋白，再用pH6.5±0.2的含有50％异丙醇的Tris·HCl缓冲液洗脱目的蛋白；
(4)将填料为季胺基的琼脂糖阴离子交换层析b柱用pH7.0±0.2的Tris·HCl缓冲液平衡，将步骤(3)活性峰上样后用pH7.0±0.2的Tris·HCl缓冲液平衡，用pH7.0±0.2的含有0.25mol/L NaCl的Tris·HCl缓冲液洗脱目的蛋白；
(5)凝胶过滤层析柱采用琼脂糖为基架的填料，该凝胶过滤层析柱用pH6.0±0.2、电导率20±5mS/cm的PBS平衡，将步骤(4)活性峰上样后用pH6.0±0.2、电导率20±5mS/cm的PBS平衡，之后收集洗脱目的蛋白。
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