[发明专利]鳖亚科生物成分特异性实时荧光检测方法及其试剂盒

说明书

本发明涉及鳖亚科生物成分特异性实时荧光检测方法及其试剂盒。本发明揭示了一种可特异性鉴定鳖亚科生物成分的引物，所述引物针对含有鳖亚科生物成分的DNA可发生特异性扩增，而对没有鳖亚科生物成分的DNA不发生特异性扩增。本发明还提供了一种简化的PCR检测方法，所述的方法可良好地应用于鉴定鳖亚科生物成分，并且具有良好的再现性、灵敏度。

技术领域

本发明属于PCR检测领域，更具体地，本发明涉及鳖亚科生物成分特异性实时荧光检测方法及其试剂盒。

背景技术

鳖亚科生物俗称甲鱼，隶属爬虫纲Reptilia龟鳖目(Testudines)、鳖科(Trionychidae)，为软壳水生龟的统称，中国现存最主要的有中华鳖(Pelodiscussinensis)、鼋(Pelochelys cantorii)、山瑞鳖(Palea steindachneri)等，其中最为常见的为中华鳖，最受人们欢迎，其需求量也最大，经济价值也最高。

鳖亚科生物不但味道鲜美、高蛋白、低脂肪，而且是含有多种维生素和微量元素的滋补珍品，能够增强身体的抗病能力及调节人体的内分泌功能，也是提高母乳质量、增强婴儿的免疫力及智力的滋补佳品(国家药典委员会，中华人民共和国药典，iv部[Z]，北京：北京化学工业出版社，2000:1-317)。它不仅是餐桌上的美味佳肴，而且是一种用途很广的滋补药品和中药材料，自古以来就被人们视为滋补的营养保健品。由于鳖亚科生物具有较高的营养价值以及药用价值，近些年需求量逐年增加。2013年我国鳖亚科生物总产量达30万吨。

大多数鳖亚科生物(如中华鳖)，自然外塘养殖需要3年以上的时间才能作为商品上市。由于其生长周期慢，对于一些加工品鳖亚科生物商品，一些不法商家，受利益驱使，用一些非鳖亚科生物材料来假冒替换鳖亚科生物的现象时有发生。

目前，中国的鳖亚科生物制品主要有粉、液、酒、胶囊等，这些深加工产品由于缺乏完整的形态学特征，故很难从形态学上鉴定。某些不法商贩为利益最大化，常用非鳖亚科生物成分充当鳖亚科生物，这不仅影响鳖亚科生物贸易市场的公正性，而且还侵害了消费者的合法权益。为了维护消费者权益，规范交易市场，因此建立鳖亚科生物成分的分子检测方法尤为重要。

加工品鳖亚科生物，由于缺乏外观特征，其真伪很难辨别。而目前，还未见国内外有公开报道针对鳖亚科生物成分鉴定方法。

因此，本领域需要建立快速、准确、易推广的鳖亚科生物成分的鉴定方法，用于对鳖亚科生物进行明确的区分。

发明内容

本发明的目的在于提供鳖亚科生物成分特异性实时荧光检测方法及其试剂盒。

在本发明的第一方面，提供一种鉴定鳖亚科生物成分的方法，所述方法包括：

以待测样品的DNA为模板，以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物进行PCR扩增；若发生特异性扩增，则表明待测样品中包含鳖亚科生物成分。

在一个优选例中，所述的方法中，以SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物以及SEQ ID NO:3所示的Taqman探针进行实时荧光PCR检测。

在另一优选例中，所述的方法中，以真核生物18S rRNA作为检测内参，检测真核生物18S rRNA的引物如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示。

在另一优选例中，所述的方法中，以SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物以及SEQ ID NO:6所述的Taqman探针进行真核生物18S rRNA的实时荧光PCR检测。

在另一优选例中，所述的方法中，所述的待测样品是食品、饮料、保健品。

在本发明的另一方面，提供一种用于鉴定鳖亚科生物成分的引物，所述引物是引物对，其序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。