[发明专利]通过检测游离核酸诊断结核病的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及一种通过检测游离核酸诊断结核病的试剂盒及其应用。

背景技术

结核病是严重威胁人类健康的传染性疾病，每年有200万人死于结核病，其死亡率在传染性疾病中仅低于艾滋病排第二。早期快速诊断是控制结核病疫情的重要环节，但目前结核病的临床诊断面临很多问题。

细菌学检查是诊断结核病的金标准，但是痰培养敏感性只有50％左右，且只有在患者排菌期才能检测到。同时，细菌学培养一般都在1个月后才能出结果，所以存在敏感性低、诊断周期长等缺点。而影像学检查作为另一项临床常规检查是发现和诊断结核病的重要方式。但影像学结果受主观性因素影响比较大，不同医生、不同医院诊断结果差异较大，因此在诊断特异性上存在不足。而另一项临床常用的γ-干扰素释放实验只能说明受检者是否感染过结核分枝杆菌，无法区分活动性结核病患者及潜伏感染者，因此也不能作为诊断结核病的确诊依据。

近年来分子生物学技术发展迅速，TB-PCR、GeneXpert等技术为结核病的快速诊断提供了新途径。但这些方法仅限于痰标本、新鲜组织、脑脊液等标本，很难应用于血液标本。其主要原因结核分枝杆菌主要分布在发病病灶中，除了血行播散等极特殊情况，一般很少出现在血液中。另外，结核性胸腔积液标本中结核分枝杆菌荷菌量通常很低，不仅培养阳性率很低(5-10％)，常用分子检测技术的阳性率也不理想(30-40％)。

因此，结核病诊断急需一种能更加准确、快速、方便的新技术方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种通过检测游离核酸诊断结核病的产品及其应用。

所述游离核酸为人体体液中游离于细胞外的微量内源性或外源性核酸片段。

本发明所提供的应用具体为：用于检测体液的游离核酸中是否含有结核分枝杆菌特异基因的物质在制备诊断或辅助诊断结核病的试剂盒中的应用。

在所述应用中，所述用于检测体液的游离核酸中是否含有结核分枝杆菌特异基因的物质，包括：(1)从体液中提取游离核酸的物质；(2)检测游离核酸中是否含有结核分枝杆菌特异基因的物质。

本发明所提供的用于诊断或辅助诊断结核病的产品，含有用于检测体液的游离核酸中是否含有结核分枝杆菌特异基因的物质。

进一步，所述用于检测体液的游离核酸中是否含有结核分枝杆菌特异基因的物质，包括：(1)从体液中提取游离核酸的物质；(2)检测游离核酸中是否含有结核分枝杆菌特异基因的物质。

根据需要，所述产品还可包含数据处理装置；所述数据处理装置内设模块；所述模块具有如下功能：根据所述游离核酸中是否含有所述结核分枝杆菌特异基因的检测结果确定待测者是否为结核病患者，若所述待测者的体液中的游离核酸中含有所述结核分枝杆菌特异基因，则所述待测者为或候选为结核病患者，若所述待测者的体液中的游离核酸中不含有所述结核分枝杆菌特异基因，则所述待测者不为或候选不为结核病患者。

在上述应用和产品中，所述从体液中提取游离核酸的物质可为游离核酸提取试剂盒。在本发明的一个实施例中，所述从体液中提取游离核酸的物质具体为Qiagen公司货号为55114的游离核酸提取试剂盒和QIAvac24Plus仪器。

在上述应用和产品中，所述检测游离核酸中是否含有结核分枝杆菌特异基因的物质可为用于检测结核分枝杆菌的PCR试剂盒。

其中，所述结核分枝杆菌特异基因具体可为结核分枝杆菌的IS6110基因(核苷酸序列如序列表中序列1。相应的，所述检测游离核酸中是否含有结核分枝杆菌特异基因的物质可为用于扩增所述结核分枝杆菌的IS6110基因的引物对。在本发明的一个实施例中，所述检测游离核酸中是否含有结核分枝杆菌特异基因的物质具体为中山大学达安基因股份有限公司的货号为DA-B052的用于检测结核分枝杆菌的IS6110基因的PCR试剂盒；产品名称是《结核分枝杆菌核酸检测试剂盒(PCR-荧光法)》，食药局注册号：国械注准20153400357。

在本发明的一个实施例中，所述体液具体为血液或胸腔积液。

本发明开发了一种通过检测血液、胸腔积液等临床常见液体标本中结核分枝杆菌游离核酸成分进行结核病快速诊断的新产品。由于游离核酸不需要收集结核分枝杆菌活菌或完整菌体，因此相比其他的核酸检测方法具有更好的安全性和敏感性。同时该产品可以在3小时内给出结果，具有快速、简便等特点。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。