[发明专利]一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子MiR-141及其应用

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤生物治疗领域，涉及一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子MiR-141及其应用。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其高发病率严重威胁着女性的身体健康。目前，以他莫昔芬为基础的内分泌疗法对雌性激素受体(ER)阳性乳腺癌患者的疗效具有重要意义。

他莫昔芬是目前ER阳性乳腺癌治疗的临床一线用药，该药为雌二醇竞争性拮抗剂，通过与雌二醇竞争性结合雌激素受体，减弱雌激素受体介导的肿瘤增殖转移相关的信号转导，从而达到治疗肿瘤的作用。但在肯定治疗效果的同时，不得不承认肿瘤细胞产生耐药现象是ER阳性乳腺癌转移和复发的重要原因，他莫昔芬出现的耐药现象是限制其临床疗效的主要原因。

发明内容

本发明的目的在于提供一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子MiR-141及其应用。

本发明是通过以下技术方案来实现：

本发明公开了一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子MiR-141，MiR-141的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

本发明还公开了上述的microRNA分子MiR-141作为乳腺癌他莫昔芬耐药标志物的应用。

所述的microRNA分子MiR-141在雌性激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬耐药细胞中低表达。

所述的microRNA分子MiR-141在雌性激素受体阳性乳腺癌他莫昔芬敏感细胞中高表达。

本发明还公开了上述的microRNA分子MiR-141在制备针对乳腺癌他莫昔芬耐药的药物中的应用。

本发明还公开了上述的microRNA分子MiR-141作为设计抗乳腺癌他莫昔芬耐药的药物靶点的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明公开了一种与他莫昔芬耐药性相关的microRNA分子，为MiR-141，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。MiR-141具有在ER阳性乳腺癌他莫昔芬耐药细胞中低表达、在ER阳性乳腺癌他莫昔芬敏感细胞中高表达的特性，是一种新的乳腺癌他莫昔芬耐药标志物。因此，本发明为设计抗乳腺癌他莫昔芬耐药药物提供了新的靶点，并以此为依据，用以设计和开发直接针对乳腺癌他莫昔芬耐药的新药。本发明公开的MiR-141具有促进乳腺癌细胞耐药的生物学功能及作用机制，为有效逆转乳腺癌他莫昔芬耐药及提高乳腺癌的临床化疗效果提供有效途径。

附图说明

图1为构建MCF-7他莫昔芬耐药细胞系(MCF-7/TR)，通过细胞增殖-毒性实验检测MCF-7/TR对他莫昔芬的耐药能力。

图2为Real-timePCR检测MCF-7/TR及MCF-7亲本细胞中MiR-141的表达水平。

图3为细胞增殖-毒性实验检测转染MiR-141后构建的MCF-7/TR细胞对他莫昔芬的耐药能力。

图4为细胞增殖-毒性实验检测转染MiR-141antagomiR后乳腺癌MCF-7亲本细胞对他莫昔芬的耐药能力。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。

他莫昔芬在乳腺癌的治疗过程中发挥着重要作用，但出现的耐药现象是限制其临床疗效的主要原因。明确新的microRNA在乳腺癌细胞他莫昔芬耐药中的生物学功能和机制为有效提高乳腺癌的临床疗效提供新的生物靶标选择。

本发明公开了一种肿瘤耐药microRNA分子，为MiR-141，其核苷酸序列为UAACACUGUCUGGUAAAGAUGG。

本发明还公开了MiR-141作为设计抗乳腺癌他莫昔芬耐药药物靶点的用途，以及MiR-141在乳腺癌他莫昔芬耐药性的临床诊断中的应用，以及根据这一靶点设计出的药物。

1、构建MCF-7他莫昔芬耐药细胞系(MCF-7/TR)

采用高浓度短时间他莫昔芬冲击法诱导MCF-7/TR耐药细胞株。取对数生长期的MCF-7细胞约10^7个，接种于直径为10cm的培养皿中，待细胞生长稳定后加入终浓度为10μmol/L的他莫昔芬，2～3天换液1次，每次换液后加入等浓度的他莫昔芬。经过2月的培养后，通过有限稀释法获得单克隆的乳腺癌MCF-7他莫昔芬耐药细胞，并在7d无药物干预下扩增细胞。为了维持MCF-7/TR耐药细胞株的耐药性，细胞长期在终浓度为2μmol/L的他莫昔芬的培养液中培养。

2、检测MCF-7亲本细胞及MCF-7/TR细胞中miR-141的表达量