[发明专利]一套用于沙门氏菌检测的多核苷酸、方法和试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于沙门氏菌检测的多核苷酸、方法和试剂盒。具体地本发明中公开了可用作沙门氏菌实时荧光PCR检测标准分子的多核苷酸和DNA构建物pXL10和pXL11。本发明的质粒标准分子解决了沙门氏菌实时荧光PCR检测中标准物质缺乏的难题，保证沙门氏菌实时荧光PCR方法检测结果的可比性，为沙门氏菌实时荧光PCR方法检测提供了可靠质量控制方法。

技术领域

本发明涉及一套生物工程技术领域的质粒分子，具体涉及一套用于沙门氏菌检测的多核苷酸、方法和试剂盒。

背景技术

随着社会的进步和人民生活水平的提高，食品安全已经成为一个全球关注的焦点问题，由各种食源性病原微生物引起的食物中毒事件，越来越多地引起专家和各国政府的关注。及时有效地检测和确定致病菌成为食源性疾病预防和治疗的关键。沙门氏菌是一种重要的食源性致病菌，由沙门氏菌引起的食物中毒事件在世界各国频频报道。2007年2月，美国发生的“花生酱事件”，2005～2006年间，美国发生的“番茄事件”均是因沙门氏菌引发。2006年卢森堡公国，沙门氏菌引起133人食物中毒，1人死亡。2005年6～10月之间，澳大利亚塔斯马尼亚州爆发了5次沙门氏菌引起的食物中毒，感染125人。2005年法国因牛奶引起的沙门氏菌中毒事件，同时感染100多婴儿。1990～2003年间西班牙加泰罗尼亚地区，共爆发1078次食物中毒，其中因沙门氏菌引起为871次，14695人感染，1534人住院治疗，4人死亡，所占比例高达80.8％。在我国，细菌性食物中毒中有70％～80％是由沙门氏菌引起的，以沙门氏菌引起的食物中毒占细菌性食物中毒的首位。由上可见，食品行业沙门氏菌的检测尤为重要。

现有沙门氏菌检测方法主要为生化鉴定和PCR相关方法。生化鉴定方法耗时耗力，而PCR方法和荧光定量PCR方法具有快速准确、敏感性强的特点，其中实时荧光定量PCR以其特异性强、灵敏度高、速度快，在沙门氏菌检测中得到广泛应用。

质粒DNA标准物质是一套含有检测目的基因的特异性片段的重组质粒分子，在PCR定性检测中可以作为阳性对照，在PCR定量分析中可以作为定量分析的标准品，构建定量分析的标准曲线。目前质粒DNA分子作为基因检测的标准物质得到了越来越多的深入研究和应用，但是针对沙门氏菌实时荧光PCR检测方法的质粒DNA标准物质还是空白。在实际沙门氏菌实时荧光PCR时，各单位使用的多是自行设计构建的质粒DNA分子作为标准品，其中的目的基因特异性片段各不相同，同时缺乏统一的定值方法，质粒DNA分子定值准确度差，造成各实验室之间的检测结果差异极大，缺乏可比性。

发明内容

本发明的目的在于提供一套适用于沙门氏菌实时荧光定量PCR检测的质粒标准分子及其应用。

本发明的另一目的是提供一套适用于沙门氏菌实时荧光定量PCR检测的质粒标准分子及其应用。

本发明的第一方面，提供了一套分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含沙门氏菌编码吸附和侵袭上皮细胞表面蛋白的invA基因序列和/或沙门氏菌编码鞭毛抗原的sefA基因序列。

在另一优选例中，所述沙门氏菌invA基因基因序列选自下组：

(a)序列如SEQ ID NO.:1所示的多核苷酸序列；

(b)核苷酸序列与SEQ ID NO.:1所示序列的同源性≥95％(较佳地≥98％)的多核苷酸序列；

(c)序列与SEQ ID NO.:1所示多核苷酸完全匹配或完全互补并且长度为SEQ IDNO.:1所示序列长度的20％-100％(较佳地50％-100％，更佳地80％-100％，最佳地90％-100％，如95％)的多核苷酸序列；

(d)与(a)-(c)任一所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸序列。

在另一优选例中，所述沙门氏菌的sefA基因基因序列选自下组：

(a)序列如SEQ ID NO.:3所示的多核苷酸序列；