[发明专利]一种发酵生产混合醇的方法有效

专利信息
申请号: 201510875864.2 申请日: 2015-12-02
公开(公告)号: CN105586365B 公开(公告)日: 2019-11-26
发明(设计)人: 董维亮;姜岷;赵洁;孔祥平;王超;贺爱永;马江锋;吴昊 申请(专利权)人: 南京工业大学
主分类号: C12P7/16 分类号: C12P7/16;C12P7/02;C12N15/75;C12R1/145
代理公司: 32230 江苏致邦律师事务所 代理人: 徐蓓<国际申请>=<国际公布>=<进入国
地址: 211816 江苏省南京市浦口区浦*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 发酵 生产 混合 方法
【权利要求书】:

1.一种发酵生产混合醇的方法,其特征在于:所述方法分两步进行,具体如下:

第一步构建重组菌株:选用保藏号为CCTCC NO:M2010011的丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)XY16为出发菌株,将表达载体pIMP1-ptb-sadh导入到出发菌株中,获得表达sadh基因的重组菌株;所述表达载体pIMP1-ptb-sadh的构建方法具体如下:用NdeⅠ单酶切载体pIMP1-ptb,酶切线性化产物经纯化试剂盒纯化后,sadh通过一步克隆连接;将一步克隆连接的重组质粒转化到大肠杆菌(E.coli)DH5a,涂布到含有100ug/ml氨苄霉素抗性LB平板,37℃培养12-16h,挑取转化子,接到液体含有100ug/ml氨苄霉素LB培养基中,37℃、200rpm培养12h,提取重组质粒,经测序验证获得能够利用ptb启动子表达sadh的载体pIMP1-ptb-sadh;

所述表达载体pIMP1-ptb-sadh采用电转化方式导入到出发菌株中;所用电转化缓冲液配制采用270mM蔗糖,5mM NaH2PO4,缓冲液pH=7.4;电转化条件为2.0kV,电阻200Ω,电容25uF;

第二步生产混合醇:将重组菌株接入种子培养基中,通入氮气培养,在发酵培养基中加入氯化钙或碳酸钙进行厌氧发酵;

所述重组菌株厌氧发酵的发酵温度为37℃;发酵时间为72h;所述氯化钙浓度为2g/L;所述碳酸钙浓度为10g/L。

2.根据权利要求1所述发酵生产混合醇的方法,其特征在于:所述种子培养基配制如下:酵母粉0.3%,蛋白胨0.5%,可溶性淀粉1%,乙酸铵0.2%,氯化钠0.2%,七水合硫酸镁0.3%,磷酸二氢钾0.1%,磷酸氢二钾0.1%,七水合硫酸亚铁0.01%。

3.根据权利要求1所述发酵生产混合醇的方法,其特征在于:所述重组菌株厌氧发酵过程中,每1L发酵液采用的发酵培养基按照如下方法制备:葡萄糖6%,乙酸铵0.22%,磷酸二氢钾0.05%,磷酸氢二钾0.05%,氯化钠0.001%,七水合硫酸镁0.02%,七水合硫酸亚铁0.001%,一水合硫酸锰0.001%,玉米浆0.1%,碳酸钙1%(或氯化钙0.2%),红霉素10ug/mL。

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