[发明专利]一种高效介导外源基因整合的转座酶及其用途

权利要求书

1.一种融合蛋白，其由转座酶、人源的核定位信号以及一个或多个蛋白linker组成；

其中，

所述融合蛋白不是氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示的融合蛋白；

所述人源的核定位信号位于所述转座酶的上游；

所述转座酶为PB转座酶，和所述人源的核定位信号为人c-myc核定位信号；

所述转座酶和所述人源的核定位信号之间连接有所述的一个或多个蛋白linker；

所述PB转座酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:24的第2-594位所示，和所述人c-myc核定位信号的氨基酸序列如SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:22所示。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于如下的(1)－(2)项中的任意一项或者多项：

(1)所述融合蛋白是一种人工转座酶；

(2)所述转座酶为一个或多个拷贝，和/或所述人源的核定位信号为一个或多个拷贝。

3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述蛋白linker为一个或多个甘氨酸和/或一个或多个丙氨酸。

4.一种核酸构建体，其编码权利要求1至3中任一权利要求所述的融合蛋白，

其中，所述核酸构建体的核苷酸序列非SEQ ID NO:5所示。

5.根据权利要求4所述的核酸构建体，其中，编码PB转座酶的核酸序列如SEQ ID NO:23所示，和/或编码人c-myc核定位信号的核酸序列如SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:21所示。

6.一种重组载体，其含有权利要求4或5所述的核酸构建体。

7.根据权利要求6所述的重组载体，其中，所述重组载体为重组克隆载体、重组真核表达质粒或者重组病毒载体。

8.根据权利要求7所述的重组载体，其中，所述重组克隆载体为权利要求4或5所述的核酸构建体与pUC18、pUC19、pMD18-T、pMD19-T、pGM-T载体或pUC57经重组得到的重组载体。

9.根据权利要求7所述的重组载体，其中，所述重组真核表达质粒为权利要求4或5所述的核酸构建体与pCDNA3系列载体、pCDNA4系列载体、pCDNA5系列载体、pCDNA6系列载体、pRL系列载体、pMAX载体或pDC315系列载体经重组得到的重组载体。

10.根据权利要求7所述的重组载体，其中，所述重组病毒载体为重组腺病毒载体、重组腺相关病毒载体、重组逆转录病毒载体、重组单纯疱疹病毒载体或重组痘苗病毒载体。

11.一种重组宿主细胞，其含有权利要求4或5所述的核酸构建体或者权利要求6至10中任一权利要求所述的重组载体。

12.根据权利要求11所述的重组细胞，其中，所述重组宿主细胞为重组的哺乳动物细胞。

13.根据权利要求12所述的重组细胞，其中，所述重组的哺乳动物细胞为重组的原代培养T细胞、重组的Jurkat细胞、重组的K562细胞、重组的肿瘤细胞、重组的HEK293细胞或重组的CHO细胞。