[发明专利]一种检测蓝藻质粒的定量PCR试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种检测蓝藻质粒的定量PCR试剂盒及应用，普通PCR反应液I包含针对聚球藻anl50基因设计的一对特异性引物，普通PCR反应液II包含针对聚球藻CDS:ABB57481.1基因设计的一对特异性引物，定量PCR反应液I包含针对聚球藻anl50基因设计的一对特异性引物，定量PCR反应液II中包含针对聚球藻CDS:ABB57481.1基因设计的一对特异性引物，其中扩增anl50基因的普通PCR上游引物与该基因的结合位置在其定量PCR上游引物与该基因结合位置的上游，anl50基因的普通PCR下游引物与该基因的结合位置在其定量PCR下游引物与该基因结合位置的下游。该试剂盒快速检测蓝藻质粒的拷贝数，具有高灵敏度、特异性、稳定性和重现性。适用于蓝藻质粒DNA的定量检测，对于检测蓝藻细胞的DNA损伤具有实际的应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学和实验方法领域，特别提供了一种定量检测蓝藻细胞质粒DNA拷贝数的实时荧光定量聚合酶链式反应(Real Time Polymerase Chain Reaction，Real Time PCR)试剂盒，同时还涉及一种定量检测蓝藻质粒的实时荧光定量PCR试剂盒的用途。

背景技术

在分子生物学中，实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR)作为一种给未知模板进行定量分析的方法，由于其定量准确、灵敏度高、特异性强和重现性好等优点已经成为一种重要工具，被广泛应用于起始模板的测定、基因型的分析、熔解曲线分析等方面的研究。

研究表明，细胞内的质粒拷贝数与细胞的生长过程相关(E,Azzoni AR,Prazeres DM,Monteiro GA,FJ.Mol Biotechnol.2007,37(2):120-126.)。细胞质粒的拷贝数与质粒的存在与和细胞所处的环境和化合物暴露情况密切相关(PickettMA,Everson JS,Pead PJ,Clarke IN.Microbiology.2005,151(Pt 3):893-903)。对原核生物细菌中大肠杆菌(Escherichia coli)的质粒拷贝数研究的较多，衣原体的不同种(Chlamydia trachomatis和Chlamydophila pneumoniae(N16))的质粒拷贝数也有研究。真核生物中中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary(CHO)cells)也有相关报道。

目前尚缺乏对原核生物蓝藻细胞的质粒拷贝数进行定量的方法。对蓝藻质粒拷贝数的定量，可以评价蓝藻细胞的生理状态，可以检测蓝藻细胞对环境胁迫的响应，从而检测环境中的危险因素。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种通过定量检测蓝藻细胞质粒的实时定量PCR试剂盒，用于评价蓝藻细胞的生理状态，和蓝藻细胞对环境胁迫的响应。该试剂盒适用于目前存在市场上的所有类型荧光定量基因扩增仪。本发明能够检测蓝藻细胞的质粒拷贝数水平，判断蓝藻细胞正常与否，在蓝藻细胞对环境胁迫方面有良好的应用前景。

本发明的另一目的是在于提供了一种检测蓝藻质粒的定量PCR试剂盒在定量检测蓝藻细胞质粒拷贝数中的应用，上述试剂盒的灵敏度和特异性高，检测方法简便、快速，实验结果可靠。

为了实现上述的目的，本发明提供：