[发明专利]一种可视化检测不同基因型蔓枯病菌的引物及其应用

权利要求书

1.一种可视化检测不同基因型蔓枯病菌的引物，其特征在于由正向内引物DB17RG-FIP、反向内引物DB17RG-BIP、正向外引物DB17RG-F3、反向外引物DB17RG-B3和反向环引物DB17RG-LB组成；各引物序列具体如下：

DB17RG-FIP：5′-GTGAGGGCCCTGAGATGTTTG-AATTATTCGCCTACAAGCCGC-3′；

DB17RG-BIP：5′-CCGCATCCGACATCACCCTT-GCTTCGCCTTCCTCATCG-3′；

DB17RG-F3：5′-AGACCGCACTTTCGAGCT-3′；

DB17RG-B3：5′-GCGAACTGGCCAATGTGT-3′；

DB17RG-LB：5′-TCCACAAGGTCCCGCAAT-3′。

2.权利要求1所述引物在广谱检测RGI和RGII两种基因型蔓枯病菌中的应用。

3.一种可视化检测不同基因型蔓枯病菌的试剂盒，其特征在于含有权利要求1所述的引物。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于包含1mL检测溶液，所述的检测溶液包含：40μM正向内引物DB17RG-FIP、40μM反向内引物DB17RG-BIP、5μM正向外引物DB17RG-F3、5μM反向外引物DB17RG-B3、20μM环引物DB17RG-LB、10mMdNTPs、20mMTris-HCl(pH8.8)、10mMKCl、10mM(NH₄)₂SO₄、8mMMgSO₄、0.1％TritonX-100、BstDNApolymerase352单位，8μM钙黄绿素(Calcein)，0.3mMMnCl₂。

5.权利要求3所述试剂盒广谱可视化检测不同基因型蔓枯病菌的方法，其特征在于以提取的DNA为模板，利用所述引物进行环介导恒温扩增反应；观察反应溶液颜色变化，黄绿色为蔓枯病菌；棕褐色则无蔓枯病菌。

6.根据权利要求5所述试剂盒广谱可视化检测不同基因型蔓枯病菌的方法，其特征在于：提取待检微生物的DNA，取2μLDNA模板，加入23μL试剂盒中的反应液中进行环介导恒温扩增反应，反应程序为：63℃，40min。