[发明专利]结核分枝杆菌特异性CD4+T细胞表位肽P2及其应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学技术领域，特别涉及结核分枝杆菌特异性CD4⁺T细胞表位肽及其应用。

背景技术

结核病是由结核分枝杆菌感染后诱发、全球感染率最高的传染病，病死率仅次于艾滋病。仅2012年，全球新发结核病患者达860万，死亡130万。结核病疫情的新特点在于：耐药结核病例出现并呈蔓延之势；结核与艾滋病共感染情况愈演愈烈。针对这两类患者，目前并无有效的防治措施。中国是世界上结核病负担最重的国家之一，研发适合中国人群的结核病疫苗和治疗药物已时不我待。

结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB）是胞内寄生菌，对其有效控制主要依赖于细胞免疫，尤其是T细胞免疫。人体内T细胞主要分为CD4⁺T（Th）细胞和CD8⁺T（CTL）细胞两大亚群，大量研究已经证明，这两种T细胞亚群对于控制结核菌感染都具有重要作用。CD4⁺T细胞被认为是人类抗结核感染的最重要的媒介。人类主要组织相容性抗原MHCII能够递呈将结核分枝杆菌肽表位，进而激活CD4⁺T细胞，并且主要为Th1型CD4⁺T细胞，后者继而分泌IFN-γ、TNF-α和IL-2等细胞因子，加强抗原递呈细胞和CD8⁺T细胞的活性，促进其对结核分枝杆菌的清除。

T细胞无法识别完整的结核菌和蛋白抗原，而是识别经过抗原递呈细胞摄取和加工后释放出的结核表位肽。表位肽是抗原中引起免疫应答的核心部份，也称为抗原决定簇，它与抗原递呈细胞表面的HLA分子结合形成肽-HLA复合物并被递送和表达在抗原递呈细胞表面，进而活化T细胞，诱发T细胞免疫反应。CD4⁺T细胞识别HLAII类分子递呈的表位肽，而CD8⁺T细胞识别HLAI类分子递呈的表位肽。T细胞对表位肽的识别及其活化要求表位肽与抗原递呈细胞表面HLA分子稳定结合，而肽与HLA分子的亲和力是形成肽-HLA复合物的关键，因此制备诱发T细胞免疫的治疗药物和疫苗，首要步骤是筛选出高亲和力的肽，进而鉴定出具有免疫活性的表位肽。

表位肽可以完全通过人工合成获得，研发周期短；由于剔除了表位肽以外病原体其他有害成分，安全性良好；还可以将多个表位肽串联使用，加强免疫效果和减少免疫逃逸。目前已知的结核菌表位肽主要是在欧美人群中鉴定，多为HLA-A*0201限制性，而对于结核病流行最严重的非洲和东南亚人群，并没有合适的表位肽可使用。在中国，HLA-DRB1*09:01是人群中基因频率最高的HLA分子，鉴定HLA-DRB1*09:01限制性Th1表位对于研发适合中国人群的表位肽疫苗具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结核分枝杆菌特异性CD4⁺T细胞表位肽。

本发明的另一目的在于提供该结核分枝杆菌特异性CD4⁺T细胞表位肽在制备结核病疫苗、诊断试剂和治疗药物中的应用。

本发明所采取的技术方案是：

一种结核分枝杆菌特异性CD4⁺T细胞表位肽，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。

上述表位肽在制备结核病疫苗中的应用。

上述表位肽在制备结核病诊断试剂盒中的应用。

上述表位肽在制备治疗结核病药物中的应用。

本发明的有益效果是：

本发明提供了与HLA-DRB1*09:01分子亲和力高，能活化CD4⁺T细胞、诱导其增殖和分泌IFN-γ的结核分枝杆菌特异性CD4⁺T细胞表位肽P2。

本发明综合利用生物信息学、免疫信息学的技术手段，利用结核分枝杆菌自身的抗原筛选出具有抗结核活性的表位肽，其中筛选出的表位肽P2与HLA-DRB₁*09:01分子之间具有高亲和力。该表位肽是新的、未被报道过的HLA-DRB1*09:01限制性结核分枝杆菌表位肽，可被结核病人CD4⁺T细胞广泛识别。由于HLA-DRB1*09:01基因型是中国人中广泛携带的基因型之一，目前并未发现结核分枝杆菌特异的HLA-DRB1*09:01限制性Th1表位肽，本发明表位肽P2的确定，为结核病疫苗、诊断试剂和治疗药物的研发提供了理论基础和新的解决方案，对结核病的防治具有重大意义。

附图说明

图1为P2的质谱分析图；