[发明专利]一种从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的方法

说明书

本发明公开了一种从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的方法，包括如下步骤：步骤1、枣花蜜水溶液的制备；步骤2、初步纯化；步骤3、粗提物的萃取处理；步骤4、硅胶柱层析纯化。本发明通过选用大孔吸附树脂XAD‑2作为提取枣花蜜中酚类物质的吸附剂，以乙酸乙酯作为粗提液的萃取剂，同时以硅胶ZCX‑2作为分离纯化酚类化合物的吸附剂，以不同比例的二氯甲烷和甲醇混合液作为洗脱剂，确定出了从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的最佳方案，本发明能够有效的从枣花蜜中分离出高纯度的酚类化合物，分离出的三种物质的纯度可分别达到82.3％、67.7％和92.7％。

技术领域

本发明涉及一种酚类化合物的提取、纯化方法，具体涉及一种从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的方法。

背景技术

枣树具有丰富的花蜜，深受蜜蜂喜爱。枣花蜜是由蜜蜂采集枣树花儿生产的蜂蜜。枣花蜜有一种特殊的味道，具有良好的口感和甜味。枣花蜜中的酚类化合物主要来自枣花儿的花蜜和花粉，是一类含有氧杂环的有机化合物，包括单体和多聚体酚类化合物。酚类化合物主要包括酚酸、黄酮及其衍生物，是作为抗氧化活性的评价指标之一。

酚类化合物的生物活性主要表现为具有DPPH抗氧化活性，三价铁离子的还原能力，对DNA损伤的保护作用。研究表明蜂蜜的抗氧化性能主要是由于酚类化合物的作用，酚类化合物可以生成活性氧(如超氧阴离子(O)、过氧化氢(H₂O₂)和羟基自由基(OHC)等)，可以清除DPPH自由基，有显著的抑制血清脂蛋白氧化，增加细胞膜的通透性、提高抗氧化血浆和血清的活性和降低酒精中毒作用。

枣花蜜是我国最宝贵的市场蜂蜜的类型，深受消费者喜爱和赞赏。我国的枣花蜜主要产于陕西、山西和河南等省份，它符合欧盟的质量标准，在欧洲市场非常受欢迎。由于枣花蜜的发展和市场的需要，我国对于枣花蜜的研究日益深入，最近几年更是成为研究的热点。

目前，我国枣花蜜的研究主要集中在对枣花蜜理化和生理等方面的研究。程妮等人研究和比较了中国不同地区的枣花蜜样品的的理化性质、酚酸、总酚酸含量和其抗氧化性。安萨里等人研究了枣花蜜的抗真菌特性。而在对枣花蜜中酚类化合物的提取方法缺乏系统的研究，这成为制约枣花蜜中酚类化合物应用开发的瓶颈。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种从枣花蜜中提取、纯化酚类化合物的方法，包括如下步骤：

步骤1、枣花蜜水溶液的制备：向枣花蜜中加入1-10倍体积蒸馏水，搅拌均匀；

步骤2、初步纯化：大孔吸附树脂湿法装柱，加入步骤1制备得到的枣花蜜水溶液，然后依次用酸水、蒸馏水、无水甲醇进行洗脱，洗脱流速均为0.7ml/min，收集无水甲醇的洗脱溶液，旋转蒸干，即得粗提物；

步骤3、粗提物的萃取处理：将得到的酚类化合物的粗提物用蒸馏水溶解，然后用1倍体积的乙酸乙酯进行充分萃取，收集萃取相液体，旋转蒸干，收集所得干物质，即得乙酸乙酯萃取相的酚类物质；

步骤4、硅胶柱层析纯化：将所得乙酸乙酯萃取相的酚类物质上样，再分别用不同比例的二氯甲烷和甲醇混合液作为洗脱剂进行洗脱，流速为0.6ml/min，收集洗脱液，得纯化液，将纯化液旋转蒸干，得到纯化后的枣花蜜酚类化合物。

本发明的特点还在于，在步骤1中，向枣花蜜中加入蒸馏水时，枣花蜜与蒸馏水的体积比为1∶6。

本发明的特点还在于，在步骤4中，洗脱分三步进行，依次用体积比为25∶1、15∶1和13∶1的二氯甲烷和甲醇混合液作为洗脱剂进行洗脱。

本发明的特点还在于，在步骤4中，收集洗脱液时，对三次洗脱得到的洗脱液分别进行收集，并分别旋转蒸干。