[发明专利]一种豇豆抗根腐病的苗期鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于园艺作物抗病性鉴定技术领域，具体涉及一种豇豆抗根腐病的苗期鉴定方法，与作物抗病育种中抗性材料的早期快速鉴定技术领域有关。

背景技术

豇豆(学名Vignaunguiculata)俗称角豆、姜豆、带豆、挂豆角，属于豆科一年生植物，主要产于热带、亚热带和温带地区。豇豆在我国栽培历史悠久，种植分布面积广，除青海和西藏外，全国各省市区均有种植。一般以春夏栽培为主，其次是秋季栽培。近年来，随着种植面积的增长，再加上豇豆生长于高温湿热的环境，易诱发豇豆根腐病的发生。

豇豆根腐病由半知菌亚门的茄腐皮镰孢菌[FusariumsolaniSchl.]侵染所致。病菌可在病残体或厩肥及土壤中存活多年，无寄主时可腐生10年以上；种子不带菌，初侵染源主要是带菌肥料和土壤，通过农具、雨水及灌溉水传播蔓延，从伤口侵入致皮层腐烂。土壤含水量大，土质粘重或反季节栽培时易发病。豇豆根腐病早期症状不明显，直到开花结荚期植株较矮小，病株下部叶片从叶缘开始变黄枯萎，一般不脱落，病株容易拔出，茎的地下部和主根变成红褐色，病部稍凹陷，有的开裂深达皮层，剖开叶柄或茎蔓，维管束已变褐，侧根脱落或腐烂，主根全部腐烂，病株枯死，土壤湿度大时，常在病株茎基部产生粉红色霉状物，即病菌的分生孢子梗和分生孢子。

培育抗病品种是防治豇豆根腐病的重要方法之一，抗性资源的获得对于抗病育种意义重大，客观、快速地评价豇豆品种根腐病抗性的强弱是豇豆抗根腐病育种过程中最基础、最重要的环节。目前关于豇豆抗根腐病鉴定还未有人报道。关于抗性鉴定的方法最可靠的是人工病圃鉴定，该方法被认为是最接近自然实际的鉴定方法，在抗病育种过程中应用最为普遍。但此鉴定方法依赖于自然发病条件，如果环境条件不适合发病或者病圃病菌分布不均匀，容易造成抗性误判，历时太长，且具有较强的季节性。豇豆苗期鉴定方法简便、迅速、容易控制外界环境条件。因此摸索一套发病迅速、育苗时间短、管理简便、适合大批量育种材料的豇豆根腐病抗性快速鉴定方法对于评价豇豆种植材料的抗病性、培育抗病性新品种、进行合理品种布局具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种豇豆抗根腐病的苗期接种鉴定方法。该方法简便易行，所需设备较少，结果可靠，能较为准确地反映不同豇豆品种对根腐病的抗性表现。

实现本发明的技术方案为：

一种豇豆抗根腐病的苗期接种鉴定方法，包括以下步骤：

A、豇豆种子催芽：

选择市售和常用栽培的豇豆品种作为鉴定对象；

挑选籽粒饱满的豇豆种子，用纱布包好，在55℃恒温水浴锅中温汤浸种2小时，进行种子消毒，再将种子放在铺有吸水纸的培养皿中，最后33℃恒温处理，直至得到萌发种子。

B、播种与幼苗培育：

将萌发的种子播种于育苗基质(简称基质，配方见后)，进行培养，得到二叶一心的幼苗。

C、豇豆根腐病菌孢子悬浮液的制备：

a.选择豇豆根腐病田间典型病株，在发病植株茎基部病健交界处切取2mm×2mm组织，用无菌水冲洗干净；

b.对上述组织进行消毒处理，用70％酒精消毒0.5min，再用0.1％的升汞溶液消毒0.5-1min，然后用无菌水冲洗3次，每次1min，得到消毒处理后的病组织；

c.将消毒处理后的病组织接入PDA平板上，置25℃恒温条件下培养；

d.当接种后的PDA平板培养基的表面即植物病组织周围长出菌落后，将该菌落转入PDA斜面培养基中(4℃冰箱内贮存备用，或可长期应用)，筛选得到鉴定豇豆根腐病的指示菌即豇豆根腐病菌JGF，FusariumsolaniSchl.JGF，于2015年12月4日送中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCCNO：M2015723；

e.从转入菌落的PDA斜面培养基中取CCTCCNO:M2015723的豇豆根腐病菌JGF，转入PDA平板培养基中，25℃恒温培养7天，得到培养好的豇豆根腐病菌JGF；

f.将培养好的豇豆根腐病菌JGF，每皿加10ml灭菌水，用灭菌的载玻片刮取表面菌丝层，用三层纱布过滤得到分生孢子滤液，用血球计数板调整孢子浓度，得到豇豆根腐病菌JGF孢子悬浮液，孢子悬浮液浓度为6×10⁶个/mL；

D、病原菌侵染处理: