[发明专利]丹皮酚的全新结构活性代谢物

说明书

本发明首次发现了三种丹皮酚(PA)的活性代谢物。本实验公开了使用体外人肝微粒体温孵的方法简单、快速、大量地制备该三个代谢物，同时运用SPE小柱浓缩、提纯，并使用HPLC对这三个活性代谢物进行分离纯化。公开了使用小鼠离体子宫模型验证PA的三个活性代谢物的缓解子宫收缩的药理作用，从而为今后临床上痛经的治疗提供新的方法与思路。本发明提供的PA的三个活性代谢物结构如下所示：。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及丹皮酚的活性代谢物的获得方法及其主要的应用。

背景技术

丹皮酚(Paeonol，PA)又称牡丹酚，是一种从中药牡丹、芍药的根皮与徐长卿干燥根中提取出来的一种小分子酚类化合物。PA的化学名称为2-羟基-4-甲氧基-苯乙酮，分子量为166.17，呈现白色针状结晶。PA具有广泛的药理活性，主要包括抗心律失常、抗高血压、抗血栓、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤、增强细胞免疫、抗菌消炎等，临床上应用广泛。PA具有以下的化学结构：

桂枝茯苓胶囊为理血剂，具有活血、化瘀、消癥之功效，临床上主要用于治疗子宫内膜炎、附件炎、月经不调、痛经、流产后阴道出血、子宫肌瘤、宫外孕、卵巢肿瘤、前列腺增生。桂枝茯苓胶囊由中药成分桂枝、茯苓、牡丹皮、白芍、桃仁组成，其中牡丹皮与白芍中均含有PA。前期研究表明，PA不存在舒张子宫平滑肌等缓解痛经的作用，但是动物实验与离体子宫实验表明，灌胃给予PA以后能够达到缓解痛经的目的，因此寻找具有缓解痛经的相关PA的代谢物，用于痛经的治疗具有重要的价值。

发明内容

本发明旨在提供一种低毒、高效的PA的活性代谢物，从而为以后临床治疗痛经等相关疾病提供新的治疗方法。本发明提供的三个代谢物如下所示：

PA代谢物生成方法的建立：建立合适的温孵方法使用人肝微粒体体外温孵的方法对PA进行温孵，以期生成PA代谢物M1、PA代谢物M2、PA代谢物M3。

PA代谢物结构确证方法的建立：依据相关软件如Peak View与MetabolitePilot等，对PA代谢物M1、PA代谢物M2、PA代谢物M3的质谱碎片信息进行分析，并与PA原药的质谱碎片信息比对，确证PA代谢物M1、PA代谢物M2、PA代谢物M3的正确性。

PA代谢物分离纯化方法的建立：建立合适的提取分离纯化方法，获得高纯度的PA代谢物M1、PA代谢物M2、PA代谢物M3。

PA代谢物活性研究方法的建立：选取恰当的研究方法，研究PA代谢物M1、PA代谢物M2、PA代谢物M3在治疗痛经方面的活性作用。

本发明的有益效果：

本发明所建立的PA代谢物M1、PA代谢物M2、PA代谢物M3的制备方法简单快速，能够迅速获得PA的这三个代谢物。同时通过对PA代谢物M1、PA代谢物M2、PA代谢物M3的活性研究，确证了其治疗痛经的活性，为今后临床上治疗痛经提供了新的治疗方法与思路。

附图说明

图1：样品经过SPE小柱浓缩与纯化后PA代谢物M1、PA代谢物M2、PA代谢物M3的色谱图

图2：分离提纯后PA代谢物M1的色谱图

图3：分离提纯后PA代谢物M2的色谱图

图4：分离提纯后PA代谢物M3的色谱图

图5：PA代谢物M1的二级碎片信息

图6：PA代谢物M2的二级碎片信息

图7：PA代谢物M3的二级碎片信息

图8：原药PA的二级碎片信息