[发明专利]一种α-丁酸萘酚酯酶染色试剂盒

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种α‑丁酸萘酚酯酶染色试剂盒。本发明所述试剂盒包括固定液、α‑丁酸萘酚酯溶液、重氮盐、基础缓冲液、复染液，其中固定液为含有乙醇、甲醛、海藻糖、海藻酸钠和多元醇的缓冲液。本发明调整了α‑NBE染色中的固定液配方组成，在甲醛基础上加入了能够完善固定效果以及增强染色效果的乙醇、海藻糖、海藻酸钠和多元醇，不仅能够降低甲醛的危害作用，而且在保证优异的染色效果前提下将样品保存时间延长至30天，同时在基础缓冲液中增加了泊洛沙姆407，可配合固定液进一步增强染色效果，弥补了现有α‑NBE染色方法的缺陷。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及α-丁酸萘酚酯酶(α-NBE)染色液(化学染色法)，即一种α-丁酸萘酚酯酶染色试剂盒。

背景技术

细胞化学染色技术在上世纪中期盛行于血液病实验室，用化学染色方法来观察细胞内某些成分或代谢产物，弥补细胞形态学的不足，对白血病辅助鉴别诊断的提高有重要的价值。因此，临床上细胞化学染色成为辅助诊断白血病必要的、有力的手段，对急性白血病的类型鉴别诊断、发病机制研究、疗效观察和预后评估起着十分重要的作用。

α-丁酸萘酚酯酶(α-Naphthyl Butyrate Esterase，α-NBE)是一种非特异性酯酶，其主要存在于单核细胞中，而在各期粒细胞均为阴性反应，较其它酶对单核细胞特异性强。α-丁酸酯反应细胞化学染色法为1985年国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的非特异性酯酶染色方法，其检测原理为细胞内的α-NBE在一定pH条件下水解基质液中的α-丁酸萘酚，释放出α-萘酚，后者再与重氮盐偶联形成有色沉淀，定位于酶活性所在的部位，沉淀物的显色深浅与α-NBE活性成正比。单核细胞阳性产物能被氟化钠抑制，而其他细胞系的阳性产物不能被氟化钠抑制。α-NBE染色能够很好显示出粒细胞和单核细胞各自的特点，可以大幅度的提高鉴别白血病中的粒、单细胞的准确率。特别是M4、M5型急性非淋巴细胞白血病(ANLL)异质性显著，粒细胞系统和单核细胞系统在骨髓中均有不同比例的改变，很难确定单核细胞和粒细胞系统的成分，通过细胞化学染色技术可以辅助鉴别和区分单核细胞系统和粒细胞系统。

影响细胞化学染色结果的因素众多，其中标本的制备和保存方式及固定剂的选择，对酶染色结果有直接的影响。目前，细胞化学染色制片方法均为抽取病人的血或骨髓细胞后进行涂片染色，但是在实际工作中，从标本收集到染色常需要一定的时间，如样本采集后不能及时染色测定，搁置时间过久，细胞暴露干燥从而会损害细胞的结构，最终影响染色结果。因此在血细胞涂 片后需加入适量固定液对细胞进行固定，以保持细胞结构及化学成分特别是细胞内的蛋白质、酶类等活性，目前市售染色试剂盒多是以福尔马林或丙酮为基础的固定液，其成分对酶的活性有抑制作用，且用甲醛处理久存后，易氧化产生甲酸，使溶液pH降低，影响染色效果。高浓度的甲醛和丙酮毒性和刺激性较大，对环境和操作人员有伤害。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供α-丁酸萘酚酯酶(α-NBE)染色液(化学染色法)，即一种含有特定固定液的α-丁酸萘酚酯酶染色试剂盒，使所述固定液能够在保证染色效果的前提下延长保存样本的时间，同时使所述试剂盒应用于α-NBE检测时能够提高样本的染色效果，阴阳性区别显著。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种α-丁酸萘酚酯酶染色试剂盒，包括固定液、α-丁酸萘酚酯溶液、重氮盐、基础缓冲液、复染液。所述固定液为含有乙醇、甲醛、海藻糖、海藻酸钠和多元醇的缓冲液。

本发明所述试剂盒中的固定液添加了一定比例的乙醇、多元醇、海藻糖和海藻酸钠。乙醇的加入可在降低毒性较强的甲醛浓度的同时保持固定液的固定效果；海藻糖和海藻酸钠具有超强的保持细胞活力和生物大分子活性的性质，可在细胞表层形成一层特殊的保护膜，保护细胞，还可帮助细胞在玻片上充分分散开，使得制片更简易；多元醇可防止样本细胞在制片过程中干燥，多元醇选择甘油时，还可对酶活性的维持起一定的作用。

在本发明所述试剂盒中，固定液各组分浓度优选如下：