[发明专利]一种嗜酸乳杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株具有高抗胃肠道胁迫的嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)，属于微生物技术领域。

背景技术

ExpertCommittee定义益生菌为“活的微生物，以一定数量摄入，能对健康产生益处，并且这种益处超越一般的固有营养”，这表明：益生菌必须是活的，同时要以高数量存在，通常日摄入剂量为10⁹细胞量。益生菌的大部分菌株为乳杆菌属和双歧杆菌属，因这些乳酸菌生产发酵乳制品有一段长的记录历史，所以一直被沿用。

益生菌进入机体，需要耐受胃肠道酸性环境及胃肠道胆盐环境，所以如何耐受住胃酸、肠酸及胆汁，成为益生菌发挥作用的前提。因此，筛选出具有高抗胃肠道胁迫的乳酸菌是非常必要的。

东北农业大学工学硕士学位论文“抗胃肠道胁迫益生菌的筛选及产品开发”(田芬等)一文就抗胃肠道胁迫的益生菌进行了筛选，并且利用细菌生态学、生理学和基因序列分析，筛选出性能较佳的5株益生菌作为研究对象，分别为嗜酸乳杆菌KLDSAD1和AD2，动物双歧杆菌KLDS2.0001、2.0002和2.0604，继续后续的研究，并且得出嗜酸乳杆菌和动物双歧杆菌都有很好的酸和胆汁盐耐受性，动物双歧杆菌的耐酸性较强于嗜酸乳杆菌的耐酸性。

虽然研究得出的嗜酸乳杆菌KLDSAD1和AD2均具良好的胃酸耐受性，但是仍然不能达到高酸条件下的具有很好的胃肠道胁迫能力，因此，在此基础上，申请人进行了进一步的研究，进一步筛选更高的抗胃肠道胁迫能力的乳杆菌。

发明内容

本发明的目的之一是筛选出一种嗜酸乳杆菌CGMCC10436，其具有更高的胃肠道胁迫能力。

本发明的另一目的是公开这种嗜酸乳杆菌的应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一株嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)CGMCC10436，该菌株是从传统乳制品中分离的乳酸菌中筛选出的，于2015年01月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，微生物保藏号为CGMCCNo.10436，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

具体的，所述的嗜酸乳杆菌来自于内蒙古锡林郭勒盟、海拉尔市及鄂尔多斯市等地区的牧民家中采集传统方法制作的传统稀奶油或酸化奶油，用于乳酸菌的筛选。具体如下：

(1)将25g样品在无菌条件下剪碎，溶于225mL无菌生理盐水中，梯度稀释后选择合适的稀释度，取1mL稀释液加入无菌平皿，倾注于20mLMRS固体培养基上，30℃培养72h。

(2)选取菌落数量在15～150的平板，随机选取符合乳酸菌菌落形态特征的菌落，从中挑取少量细菌，溶于于MRS液体培养基中，并进行30℃培养48h。

(3)将分离到的菌株在MRS固体培养基上反复划线进行纯化。

(4)将纯化好的菌株进行革兰氏染色及过氧化氢酶实验。

(5)将所有革兰氏阳性、过氧化氢酶阴性、不形成芽孢的菌株(初步判断为乳酸菌)选出来，在其培养液中加入甘油，使甘油的最终浓度为30％(v/v)，贮藏于-80℃待用。

(6)将上述分离到暂定为乳酸菌的菌株在MRS液体培养基中活化3代后进行筛选实验。

(7)以标准菌株嗜酸乳杆菌作为对照菌株，进行以下生理生化试验：H2S试验、甲基红试验、石蕊牛乳试验、明胶液化试验、淀粉水解试验、柠檬酸盐利用试验、尿素分解试验、硝酸盐降解试验及乙偶姻产生试验，选取与标准菌株嗜酸乳杆菌生理生化试验相同的乳酸菌。

(8)提取菌株基因组DNA，进行16SrDNA测序，将本发明菌株的16SrDNA序列与NCBI嗜酸乳杆菌的序列进行比对，鉴定出，此菌株为嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)。

然后，将本发明嗜酸乳杆菌与嗜酸乳杆菌(嗜酸乳杆菌KLDSAD1、嗜酸乳杆菌酸乳杆菌KLDSAD2)进行对比，研究此次筛选出的嗜酸乳杆菌的抗胃肠道胁迫能力。试验结果表明，本研究筛选出的嗜酸乳杆菌对酸液、肠液及人工胆盐均具有较好的耐受力，并且效果明显优于嗜酸乳杆菌KLDSAD1、酸乳杆菌KLDSAD2。

所筛选出来的嗜酸乳杆菌具有高的抗胃肠道胁迫能力。