[发明专利]一种蜂胶乙醇提取液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及化合物提取技术领域，更具体地说涉及一种蜂胶乙醇提取液的制备方 法。

背景技术

蜂胶是一种具有广谱生物学活性和免疫增强作用的天然物质，具有抗感染、抗肿 瘤、增强免疫、抗氧化、抗炎等广泛的药理作用。黄酮类化合物是蜂胶发挥药理作用 的主要物质基础。

目前，蜂胶提取方法主要分为醇提和水提两类。蜂胶中黄酮类化合物能溶于醇类， 通过醇类的多次浸提把蜂胶中的黄酮类物质提取出来。因此，国内外蜂胶的提取，大 部分还是采用乙醇作提取溶剂，用乙醇提取蜂胶目前仍是一种方便、经济、有效的方 法。但乙醇提取法生产周期长，且提取效率低、不稳定。

发明内容

本发明的目的提供一种蜂胶乙醇提取液的制备方法，该制备方法提取率高，特别 解决目前提取方法中黄酮含量不稳定的问题，同时提取工艺简单，生产成本低。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种蜂胶乙醇提取液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：a. 将蜂胶置于2～8℃条件下冷冻12～24h，通过高能万用粉碎机粉碎并过40目筛筛分 备用；b.向粉碎后的蜂胶颗粒加入浓度为75～95％的乙醇溶液，按蜂胶与乙醇比例为 1:4～1:8(W/V)提取，经冷却、过滤，即得蜂胶乙醇浸出液。

进一步地，所述的步骤(2)中的乙醇浓度为95％。

进一步地，所述的步骤(2)的蜂胶与乙醇比例为1:4(W/V)。

进一步地，所述的步骤(2)中的提取温度为25～60℃，优选25℃。

进一步地，所述的步骤(2)中的提取时间为36～72h，优选48h。

进一步地，所述的蜂胶乙醇提取液作为佐剂应用于疫苗抗体中。

本发明的有益效果在于：该蜂胶乙醇提取液的制备方法提取工艺简单，生产周 期短，成本低，蜂胶提取物中黄酮含量稳定；该蜂胶乙醇提取物可以更好的作为佐剂 应用于疫苗中。

具体实施方式

下面详细说明本发明的具体实施，有必要在此指出的是，以下实施只是用于本发 明的进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域技术熟练人员根据上 述本发明内容对本发明做出的一些非本质的改进和调整，仍然属于本发明的保护范围。

主要原料与试剂：蜂胶由山东临清市清坤蜂蜡巢础加工厂提供，95％乙醇、氢氧 化钠、乙酸乙酯、乙醚丙酮、碳酸氢钠、亚硝酸钠、硝酸铝购自中国药品生物制品 检定所。

实施例1蜂胶的预处理

将蜂胶置入2～8℃条件下冷冻12～24小时变硬变脆后，利用高能万用粉碎机粉 碎冷藏后的蜂胶。取出蜂胶磨碎过40目筛筛分，混合均匀，放入干燥器中至恒重， 称5g若干份备用。

实施例2不同极性溶剂对提取蜂胶中总黄酮含量的影响

取处理过的蜂胶5g，依次用5％碳酸氢钠、95％乙醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮、 水作溶剂提取，每种溶剂分别浸提12h、24h、48h、72h。过滤取滤液按芦丁标准品法 测定其在不同浸提时间的总黄酮的含量。

用不同溶剂浸提蜂胶，其总黄酮含量比较见表1。

表1不同溶剂提取液中总黄酮含量

注：此表中的黄酮，为总黄酮，单位为％。

由表1看出，从乙醚到水是按极性由弱到强排列。乙醚、丙酮、乙酸乙酯极性弱 能较多地提取出极性弱的黄酮类物质；正丁醇极性中等，则极性强、弱的黄酮类物质 都能较多浸提出，故浸提效果最好；乙醇由于极性稍强，黄酮类物质中部分弱极性物 质提出较少；水溶液因强极性，蜂胶中脂溶性物质很难浸出故黄酮类含量很低。根据 溶剂的价格、使用安全性及回收率等因素，选择乙醇作为提取蜂胶的溶剂。

实施例3不同浓度乙醇对蜂胶黄酮总含量的影响

溶剂制备：取无水乙醇，按体积比分别稀释成含乙醇30％、60％、75％、95％的 溶剂。

处理：取粉碎过的蜂胶5g，冷处理2h后加入上述浓度的乙醇20ml在室温下(25℃) 浸提48h后过滤取滤夜，测定以不同浓度乙醇提取物的总黄酮含量。

4种不同浓度乙醇浸提总黄酮含量的比较见表2。

表2不同浓度乙醇浸提总黄酮含量

注：上表中的黄酮为总黄酮含量，单位为％。