[发明专利]癌胚抗原（CEA）定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种癌胚抗原定量试剂盒及其制备方法。

背景技术

癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)：为存在于结肠癌及胚胎结肠粘膜上皮细胞的一种糖蛋白。由胎儿胃肠道上皮组织、胰和肝的细胞所合成，通常在妊娠前6个月内CEA含量增高，出生后血清中含量已很低下，健康成年人血清中CEA浓度小于2.5μg/L。胃肠道肿瘤时因极性消失，CEA反流入淋巴或血液而而使血清CEA升高，当CEA高于20μg/L时，则意味着可能有消化道肿瘤。CEA升高常见于大肠癌、胰腺癌、胃癌、小细胞肺癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等。但吸烟、妊娠期和心血管疾病、糖尿病、非特异性结肠炎等疾病，15％～53％的病人血清CEA也会升高，所以CEA不是恶性肿瘤的特异性标志，在诊断上只有辅助价值。此外，血清CEA水平与大肠癌的分期有明确关系，越晚期的病变，CEA浓度越高。癌胚抗原(Cacinoembryonic antigen,CEA)是一种高度糖基化的分子量为180-220kDa的细胞表面糖蛋白。CEA是一个广谱性的肿瘤标志物，结肠直肠癌、胰腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等疾病均可高水平的表达。检测体液(血清、胸腔积液、痰液、唾液、精液、尿液、腹水等)CEA的含量对于肿瘤的诊断、预后、术后疗效观察具有重要的临床意义。正常血清CEA参考值为5ng/mL。

1969年，放射免疫分析法最早用于CEA的检测。尽管放射免疫分析法是最常用于抗原检测的一种方法，但是用于标记的放射性元素对操作者身体有很大的伤害。因此，酶联免疫分析法(ELISA)、压电免疫分析法、化学发光分析法、比色法、荧光免疫分析法和脂质体免疫分析法等方法被陆续开发出来。然而，这些方法中的大部分步骤繁琐，或者耗时太长，或者需要复杂昂贵的仪器设备，或者需要高度专业的操作人员，等等。

磁微粒分离酶联免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体，将免疫磁微粒分离技术与酶联免疫检测技术相结合而建立的一种新型免疫检测方法。传统ELISA方法，抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的，而磁微粒分离酶联免疫检测方法，抗原、抗体的结合反应也在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。与传统ELISA相比具有灵敏度高，检测用时少的优点。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种癌胚抗原(CEA)的定量测定试剂盒，其包含的试剂有磁分离试剂，酶标记的CEA抗体溶液，标准品，洗涤液以及化学发光底物溶液。.

所述CEA磁分离试剂为含有1mg/ml的偶联有抗CEA单克隆抗体的磁性微球，0.1mg/ml的明胶，0.3mg/ml的PEG200的70mmol/L的PBS缓冲液，pH值为8.5。

所述酶标记的CEA抗体溶液是含有1mg/ml辣根过氧化酶标记的抗CEA单克隆抗体和0.5mg/ml酪蛋白的20mmol/L的PBS缓冲液，pH值为8.5。

所述的标准品为不同浓度的CEA标准品溶液，其分别含有0、5、10、20、40、80和200ng/ml的CEA标准品的20mmol/l PBS缓冲液，pH7.4。

洗涤液由在浓度为20mol/L、pH为7.4的磷酸盐缓冲液中加入1％的Tween-20配制而成。

所述化学发光底物溶液分为发光底物A溶液和发光底物B溶液；发光底物A为0.1M、pH值为8.5的Tris-HCl缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度为5.0mg/mL的鲁米诺，所述发光底物B为是pH值为4.5的0.1M柠檬酸缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度为100mg/mL的过氧化氢和15mg/mL辣根过氧化氢酶。

本发明的另一个目的是提供所述试剂盒的制备方法，具体步骤如下：

1)CEA单克隆抗体的制备：将表达CEA单克隆抗体的杂交瘤细胞(保藏号为CGMCC NO：2504)体外培养；接种细胞数2×10⁵/ml；培养液组成为97％DMEM/F12:RPMI1640＝1:1；3％FBS；滚速0.5rpm；每隔96个小时全数换液一次，共进行两次换液，收获三次；并且细胞培养时，在培养基中加入10IU/10ml LIF(白细胞抑制因子)，2IU/10ml HCG，2IU/10ml牛胰岛素；培养上清经过过滤澄清，纯化，收集抗体即得；