[发明专利]一种鹿茸组织细胞外基质的制备方法

说明书

本发明涉及一种从鹿茸组织中获得细胞外基质材料的处理方法。将新采收鹿茸的外表面进行清洗和消毒处理后，将鹿茸横向切断，得到截面积为圆形的片状物。切取鹿茸片中部、具有血管样结构的组织块，对其进行去细胞化处理。本发明的优点为：根据鹿茸组织中具有血管样空隙的特点，采用多种工作液清洗的方法，能彻底去除鹿茸组织中的细胞类成分，获得细胞外基质成分。

技术领域

本发明涉及用于鹿茸组织中细胞外基质类成分的获得。具体地说是一种基于多种工作液持续冲洗鹿茸组织，以去除细胞类成分的清洗方法。

背景技术

鹿茸作为哺乳动物唯一能够完整持续再生的器官，在较短时时期内可以产生大量的血管、神经、软骨等组织，被认为是研究组织生长调节机制的理想模型。而鹿茸组织中的细胞外基质为鹿茸的再生过程提供了至关重要的微环境。因此以鹿茸为样品，提取获得其细胞外基质组织，能获得一种全新的生物材料，用于组织工程、干细胞培养、再生模型建立等方面的研究。

鹿茸中存在大量的血管组织，方向与鹿茸径向一致。这些血管中残留有大量的血液。将鹿茸截断时，血管也被截断，此时血管成为两端开口的一段血管。这样，在血管的一端向血管内灌注溶液就能冲洗整个组织。因此利用鹿茸组织的这一特性，能将利用多种洗脱溶剂将鹿茸组织中的细胞成分去除彻底。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能彻底去除鹿茸中细胞类成分的清洗方法，以期解制备一种新型的基质材料用于生物学研究及应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

将鹿茸切成厚度适宜的片状结构，选取具有贯通血管结构的部分，应用多种清洗溶液进行冲洗，以去除细胞类成分。

具体为：

1)切片处理

将新鲜采收的鹿茸外表面用生理盐水清洁干净后用55％-85％酒精消毒处理；沿横截面方向将鹿茸切成片状结构，切取鹿茸片中部、具有血管样结构的组织块，对其进行去细胞化处理。

2)去细胞化处理

利用自制的装置，将合适大小的鹿茸组织块置于两端开口的中空管中，保证组织块在管中不能随意移动。然后将处理管两端的盖子拧死，并连接乳胶管。通过蠕动泵从其中一侧向管内泵入工作液，工作液充满塑料管，并从另一端流出，流出液收集到废液瓶中。处理时先后采用三种溶液进行顺序冲洗，直至样品中的细胞成分彻底去除。

本发明的优点为：(1)需要设备简单，操作简便；(2)可彻底去除鹿茸组织中的细胞类成分。

根据鹿茸组织中具有血管样空隙的特点，采用多种工作液清洗的方法，能彻底去除鹿茸组织中的细胞类成分，获得细胞外基质成分。

附图说明

图1为去细胞化处理前后鹿茸组织的对比；(左：处理前，右：处理后)

结果显示：处理后，鹿茸切片中的细胞类成分为被清除干净。

图2为所得去细胞化细胞外基质及该基质接种细胞后的组织切片图；(左：单纯的去细胞化基质，右：去细胞化基质接种细胞后)

结果显示：处理得到的鹿茸基质中不含有细胞，基质接种细胞后可见细胞贴附生长。

具体实施方式

将新鲜采收的鹿茸外表面用生理盐水清洁干净后用75％酒精消毒处理；沿横截面方向将鹿茸切成片状结构，切取鹿茸片中部、具有血管样结构的组织块，对其进行去细胞化处理。利用自制的装置，将合适大小的鹿茸组织块置于两端开口的中空管中，保证组织块在管中不能随意移动。然后将处理管两端的盖子拧死，并连接乳胶管。通过蠕动泵从其中一侧向管内泵入工作液，工作液充满塑料管，并从另一端流出，流出液收集到废液瓶中。处理时先后采用三种溶液进行顺序冲洗，直至样品中的细胞成分彻底去除。