[发明专利]一种欧亚瑞香种子诱导及快速繁殖的方法

权利要求书

1.一种欧亚瑞香种子诱导及快速繁殖的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

(1)外植体的消毒：将2～5滴洗洁精滴入装50ml自来水的烧杯中，取无病虫害欧亚瑞香种子置于烧杯中浸泡5min，用纱布擦洗种子表面污垢，线状自来水冲洗5min～10min，在超净工作台内用75v/v％的乙醇灭菌30S，无菌水冲洗1次，再用0.1v/v％HgCl₂消毒12min，无菌水冲洗3次，用无菌滤纸吸干外植体表面水分，获得外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；

(2)无菌芽的诱导：将步骤(1)得到的外植体接种于MS启动培养基中，在培养温度为23±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为12h/d的条件下培养20～30d开始萌发，得到无菌芽，所述启动培养基是以MS为基本培养基，还加入0.5～2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0～1.0mg/L的萘乙酸NAA，0.05～1.5mg/L的赤霉素GA3，30g/L蔗糖，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(3)无菌芽的增殖：将步骤(2)中得到的无菌芽剪切成1～2cm长接种于MS增殖培养基中，在培养温度为23±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为12h/d的条件下培养15～20d便长出更多的芽丛，所述增殖培养基为MS基本培养基，添加0.1～2.5mg/L的噻重氮苯基脲TDZ、0.5～2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.05～1.0mg/L的吲哚乙酸IBA，30g/L蔗糖，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

(4)无菌苗的壮苗生根：将步骤(3)中得到的芽丛剪切为单芽置于1/2MS生根培养基中，在培养温度23±2℃，光照强度20～30μmol/m²·s，光照时间为12h/d的条件下进行生根培养，培养10～25d开始生根，所述生根培养基是以1/2MS为基本培养基，还加入0～1.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.3～1.5mg/L的萘乙酸NAA、0～1.5g/L的活性炭，5g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。