[发明专利]一种检测复方依山红提取物对HepG 2.2.15细胞的药效的方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测复方依山红药效的方法。更具体地说，本发明涉及一种检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法

背景技术

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)引起的一种严重的世界范围内危害人类健康的疾病，在我国感染率高达10％-20％，HBV持续感染会导致肝硬化和原发性肝细胞肝癌等肝脏疾病，现有的抗病毒药物如α-干扰索和拉米夫定的疗效仍然不能令人满意，因此寻找安全有效的抗HBV药物已成为当今医药学界一项迫切任务。中医药治疗慢性乙型肝炎在我国具有悠久的历史，近几十年有学者陆续对一些中草药进行抗HBV筛查，发现确实存在一些高效、低毒抑制HBV的中草药。复方依山红是从壮族民间挖掘出来的治疗乙型肝炎的经验方，对慢性乙型肝炎具有较好的治疗效果。该方由壮药材满山红、毛鸡骨草、田基黄、牛大力等组成，具有祛邪排毒、清利散瘀、疏通道路、扶助正气的作用(李常伟，李兵，卢汝梅，庞宇舟.复方依山红组方药材的化学成分研究进展[J].广西中医药，2014，(5)：7-8)。但是目前复方依山红的药理机制还未清楚，为了更好地促进复方依山红制剂的研制，本发检测评价复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供一种评价复方依山红药效的方法。目前复方依山红的药理机制还未清楚，为了更好地促进复方依山红制剂的研制，本发明通过测试所述溶液b的吸光值A及所述上清液a的吸光值A₁，所述溶液d的吸光值A₂及所述上清液c的吸光值A₃来计算HepG2.2.15细胞的存活率及不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率；确定不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效，能客观灵敏的反应复方依山红药效，且本发明的检测方法简单易操作。

本发明提供的技术方案为：

一种检测复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效的方法，所述检测方法包括以下步骤：

1)、配置不同浓度的复方依山红提取物溶液；

2)、将HepG2.2.15细胞接种到RPMl-1640培养基中培养形成细胞悬浮液；

3)、依次将步骤1)中所述的不同浓度复方依山红提取物溶液分别加入到所述细胞悬浮液中，其中设有不加复方依山红提取物溶液的细胞悬浮液作为对照；

4)、将步骤3)中加入了不同浓度复方依山红提取物的细胞悬浮液进行离心，分离上清液a后，加入染色剂染色，染色后用醋酸清洗，再加入碱缓冲溶液后成溶液b，最后测试所述溶液b的吸光值A及测试所述上清液a的吸光值A₁；将步骤3)中不加复方依山红提取物的细胞悬浮液进行离心，分离上清液c后，加入染色剂染色，染色后用醋酸清洗，再加入碱缓冲溶液后成溶液d，测试所述溶液d的吸光值A₂及测试所述上清液c的吸光值A₃；

5)、通过测试所述溶液b的吸光值A及所述上清液a的吸光值A₁，所述溶液d的吸光值A₂及所述上清液c的吸光值A₃来计算HepG2.2.15细胞的存活率及不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率；确定不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞的药效，其中所述HepG2.2.15细胞的存活率＝(A/A₂)×100％，不同浓度复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞分泌的HBsAg与HBeAg的抑制率＝(A₁/A₃)×100％。

优选的是，所述配置不同浓度的复方依山红提取物溶液为：取复方依山红提取物，溶于无菌去离子水，制成浓度为0.00032mg/L、0.0016mg/L、0.08mg/L、0.04mg/L、0.2mg/L、1mg/L的复方依山红提取物溶液。

优选的是，所述复方依山红提取物制备方法：复方依山红由重量份的壮药材满山红20、毛鸡骨草20、牛大力10、田基黄10、黄根5组成，分别取4份所述复方依山红，每份65g，将所述4份复方依山红分别用95wt％乙醇、60wt％乙醇、30wt％乙醇、水作为提取溶剂，每种溶剂回流提取三次，合并提取液，减压干燥后分别得四种复方依山红提取物，不同浓度的醇萃取复方依山红提取物，能够更好的确定复方依山红提取物对HepG2.2.15细胞作用的有效部位。