[发明专利]一种大鼠肝S9的诱导及制备方法

权利要求书

1.一种大鼠肝S9的诱导及制备方法，其特征在于：(a)挑选大鼠，按照大鼠的体重，用不同的方式和剂量腹腔注射两种诱导剂以确定最佳诱导方法；(b)处死大鼠，在无菌条件下，除去肝中残血，取出肝脏；(c)在无菌条件下，按一定的肝湿重比加入预冷的储存缓冲液中，充分剪碎，在冰浴中匀浆；(d)将匀浆好的组织液低速离心，收集上清和沉淀，并将上清高速离心收集上清，即首次获得大鼠肝S9；(e)将收集的沉淀，按一定的比重加入预冷的储存缓冲液，在无菌和冰浴条件下充分研磨并在不同条件下超声破碎细胞，将其在高速离心收集上清，即再次获得大鼠肝S9；(f)BCA法和CO还原法检测不同条件下大鼠肝S9蛋白以及酶含量。

2.根据权利要求1所述的一种大鼠肝S9的诱导及制备方法，其特征在于，所述的大鼠为SD雄性大鼠，体重为230±20g。

3.根据权利要求1所述的一种大鼠肝S9的诱导及制备方法，其特征在于，所述的两种诱导剂为苯巴比妥钠(溶于PBS)和β-奈黄酮(溶于玉米油)，所述的最佳诱导方法为第1d大鼠腹腔注射剂量为30mg/kg的苯巴比妥钠和剂量为40mg/kg的β-萘黄酮，第2d注射剂量为80mg/kg的β-萘黄酮，第3d注射剂量为60mg/kg的苯巴比妥钠，第4d注射剂量为80mg/kg的β-萘黄酮，第5d注射苯巴比妥钠60mg/kg。

4.根据权利要求1所述的一种大鼠肝S9的诱导及制备方法，其特征在于，所述的步骤b中除去肝中残血是将事先冰浴的肝素液经肝门静脉灌洗除去残血，所述的肝素液为10mM PBS(0.15M KCl，pH 7.4)，20％肝素(2500U/mL)。

5.根据权利要求1所述的一种大鼠肝S9的诱导及制备方法，其特征在于，所述的步骤c中按一定的肝湿重比加入预冷的储存缓冲液，其比例为 1∶2-4，所述的储存缓冲液为0.15M KCl(pH7.4)。

6.根据权利要求1所述的一种大鼠肝S9的诱导及制备方法，其特征在于，所述的步骤d中匀浆好的组织液低速离心，其离心速度为1500rpm/min，时间5min。

7.根据权利要求1所述的一种大鼠肝S9的诱导及制备方法，其特征在于，所述的步骤e中按一定比重加入预冷的储存缓冲液，其比例为1∶2，所述的在不同冰浴超声条件下破碎细胞，其超声条件分别为34w/50w/65w超声功率下，超声10s，间隔5s的条件下，超声20次。