[发明专利]甲型H1N1流感病毒核酸的定性检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及诊断技术领域，特别是涉及一种甲型H1N1流感病毒核酸的定性检测试剂盒。

背景技术

甲型H1N1流感病毒是A型流感病毒，携带有H1N1亚型猪流感病毒毒株，包含有禽流感、猪流感和人流感三种流感病毒的核糖核酸基因片断，同时拥有亚洲猪流感和非洲猪流感病毒特征。人群对甲型H1N1流感病毒普遍易感，并可以人传染人，人感染甲流后的早期症状与普通流感相似，包括发热、咳嗽、喉痛、身体疼痛、头痛、发冷和疲劳等，有些还会出现腹泻或呕吐、肌肉痛或疲倦、眼睛发红等。2009年开始，甲型H1N1流感在全球范围内大规模流行。2010年8月，世卫组织宣布甲型H1N1流感大流行期已经结束。

在此期间，基于PCR原理的核酸检测方法特别是基于real-timeRT-PCR的方法是一种快速有效的诊断方法，在突发传染病应急工作中发挥了巨大作用。H1N1病毒核酸检测原理是利用核酸检测的方法，直接检测H1N1病毒的核酸RNA。核酸检测具有快速、高效、敏感和特异等优点，在感染过程中，患者体内首先出现的是病毒RNA，这时可以采用核酸检测的方法检测出来。而传统的甲型H1N1流感病毒的核酸定性检测试剂盒通常需要从样本中提取纯化的核酸分子(H1N1-RNA)，而从样本中提取核酸的步骤操作复杂。

发明内容

基于此，有必要提供一种不需要从样本中提取核酸就可以完成检测的甲型H1N1流感病毒核酸的定性检测试剂盒。

一种甲型H1N1流感病毒核酸的定性检测试剂盒，包括：

样本处理剂，包括异硫氰酸胍、柠檬酸钠、十二烷基肌酸钠、β-巯基乙醇和蛋白酶K；

用于靶核苷酸扩增的上游引物，所述上游引物包括上游引物InfAForword、上游引物SWInfAForword和上游引物SWH1Forword；

用于靶核苷酸扩增的下游引物，所述下游引物包括下游引物InfAReverse、下游引物SWInfAReverse和下游引物SWH1Reverse；

用于靶核苷酸检测的Taqman探针，所述Taqman探针包括Taqman探针infAProbe、Taqman探针SWinfAProbe和Taqman探针SWH1Probe，所述Taqman探针infAProbe的两端分别结合有第一荧光基团和第一荧光猝灭剂，所述Taqman探针SWinfAProbe的两端分别结合有第二荧光基团和第二荧光猝灭剂，所述Taqman探针SWH1Probe的两端分别结合有第三荧光基团和第三荧光猝灭剂；以及

RNA一步法反应缓冲液。

在一个实施例中，所述样本处理剂用于与检测样本混合均匀后在55℃～70℃加热10min～15min。

在一个实施例中，所述样本处理剂中，所述异硫氰酸胍的浓度为0.2mol/L～2mol/L，所述柠檬酸钠的浓度为10mmol/L～30mmol/L，所述十二烷基肌酸钠的质量百分含量为0.2％～1％，所述β-巯基乙醇的浓度为0.05mol/L～0.1mol/L，所述蛋白酶K的浓度为1mg/mL～5mg/mL。

在一个实施例中，所述上游引物InfAForword的序列为SEQIDNo.1所示的序列，所述上游引物SWInfAForword的序列为SEQIDNo.2所示的序列，所述上游引物SWH1Forword的序列为SEQIDNo.3所示的序列；

所述下游引物InfAReverse的序列为SEQIDNo.4所示的序列，所述下游引物SWInfAReverse的序列为SEQIDNo.5所示的序列，所述下游引物SWH1Reverse的序列为SEQIDNo.6所示的序列。

在一个实施例中，所述Taqman探针infAProbe的序列为SEQIDNo.7所示的序列，所述Taqman探针SWinfAProbe的序列为SEQIDNo.8所示的序列，所述Taqman探针SWH1Probe的序列为SEQIDNo.9所示的序列。

在一个实施例中，所述Taqman探针infAProbe的5’端结合有FAM，所述Taqman探针infAProbe的3’端结合有BHQ1；

所述Taqman探针SWinfAProbe的5’端结合有FAM，所述Taqman探针SWinfAProbe的3’端结合有BHQ1；

所述Taqman探针SWH1Probe的5’端结合有FAM，所述Taqman探针SWH1Probe的3’端结合有BHQ1。