[发明专利]一种高效表达罗氏沼虾甲壳素的酿酒酵母工程菌在审
| 申请号： | 201510908140.3 | 申请日： | 2015-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN105296374A | 公开（公告）日： | 2016-02-03 |
| 发明（设计）人： | 杜婕;蒋伶活 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12P21/02;A23K20/195;A23K50/80;C12R1/865 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 耿晓岳 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 表达 罗氏沼虾 甲壳素 酿酒 酵母 工程 | ||
1.一种高效表达罗氏沼虾甲壳素的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述工程菌的构建方法是将罗氏沼虾甲壳素MrCrustin的cDNA克隆至表达质粒pHAC181上得到测序验证正确的重组质粒pHAC181-MrCrustin，然后设计同源重组引物，利用同源重组技术将目的基因MrCrustin整合至酿酒酵母宿主菌株的GAL1启动子下游。
2.根据权利要求1所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述MrCrustin的cDNA的CDS区域翻译后的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。
3.根据权利要求1所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述MrCrustin的cDNA的CDS区域的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
4.根据权利要求1所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述pHAC181是在YCplac181的SphI和EcoRV位点插入3个组氨酸标签得到的。
5.根据权利要求1所述的酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述酿酒酵母工程菌是按照如下方法构建得到的：(1)以罗氏沼虾的cDNA为模板PCR扩增或者直接化学合成，得到核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的MrCrustin基因片段；(2)将MrCrustin基因片段克隆到表达质粒pHAC181上，得到重组表达质粒pHAC181-MrCrustin；(3)设计同源重组引物，对质粒pHAC181-MrCrustin进行扩增，得到含有MrCrustin基因的核苷酸片段，使用同源重组的方法，将该核苷酸片段整合至酿酒酵母菌株中GAL1启动子下游。
6.一种高效表达罗氏沼虾甲壳素MrCrustin的方法，其特征在于，所述方法是使用权利要1-5任一所述酿酒酵母工程菌为生产菌株。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法是将酿酒酵母工程菌活化后，接种于YPG培养基中，在半乳糖的诱导下培养6h；所述YPG培养基含有D-半乳糖20g/L、蛋白胨20g/L、酵母提取物10g/L。
8.权利要求1-5任一所述酿酒酵母工程菌生产得到的罗氏沼虾甲壳素MrCrustin。
9.权利要求1-5任一所述酿酒酵母工程菌在水产养殖、水产动物免疫或添加剂方面的应用。
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