[发明专利]将亚利桑那菌LAMP法检测用的引物和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学中用LAMP法对亚利桑那菌DNA的检测。

技术背景

目前食品中对亚利桑那菌的检测工作仍然沿用传统的两种细菌学鉴定方法。

第一种分离纯化鉴定方法的缺点：按最新的亚利桑那菌检测上述国家标准GB 4789.4-2010中采用的传统的分离纯化鉴定方法，阳性样品检测周期至少需6天以上；且步 骤繁琐，需经过5个步骤才能检测出样品是否含有目标菌；使用平板琼脂分离纯化细菌时， 需要依靠经验选取可疑菌落，人为因素影响检测结果，还极易造成漏检。

第二种抗原抗体反应方法的缺点：目前沙门氏菌分型仍然采用传统的抗原和生化 标准，将沙门氏菌分为四个亚属,亚利桑那菌是沙门氏菌的第Ⅲ亚属，近3000种血清型，血 清数量太大，如要在基层检测实验室配备大量价格昂贵的鉴定血清难以实现，因此在实际 检测工作中基本失去价值。传统的亚利桑那菌检测方法早已不能满足现代食品安全检测工 作的需要，必须开发快速、简便、高通量、高特异性、高灵敏度的检测方法，来丰富和完善食 品中致病菌的检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种用扩增DNA的LAMP法，检测亚利桑那菌的引物，并且还提 供用这种引物对亚利桑那菌进行LAMP法检测的方法，既提供一种比传统细菌学鉴定亚利桑 那菌更具有费用低、灵敏度高、操作简便的LAMP法检测亚利桑那菌的方法。

本发明所说的亚利桑那菌是：亚利桑那菌Salmonellaarizonae。

用本发明的引物的作用是，使用分子生物学LAMP检测方法，在样品中检测出亚利 桑那菌DNA。

用本发明设计的LAMP引物与引物是同一个概念。

本发明的LAMP技术也是LAMP法的含义，也就是环介导等温扩增法（loop- mediatedisothermalamplification，）简称LAMP技术或LAMP法或LAMP检测法。

本发明的引物设计和应用概述：首先对以往文献进行梳理，分析了沙门氏菌属,包 括亚利桑那菌spvA基因、16SrRNA、ORF的部分基因序列，最终确定spvA基因作为模版检测基 因。最终确定spvA基因作为模版检测基因的参考文献是：

第一参考文章名称为：TowardapopulationgeneticanalysisofSalmonella: GeneticdiversityandrelationshipsamongstrainsofserotypesS. choleraesuis,S.derby,S.dublin,S.enteritidis,S.heidelberg,S. infantis,S.newport,andS.typhimuriu

第一参考文章作者为：PILARBELTRAN*t,JAMESM.MUSSER*,REINERHELMUTHt, JOHNJ.FARMERiii§,WAYNEM.FRERICHS?,I.KAYEWACHSMUTH§,KATHLEENFERRIS ?,ALMAC.MCWHORTER§,JOYG.WELLS§,ALEJANDROCRAVIOTOt,ANDROBERTK. SELANDER*

第一参考文章期刊名和时间为：Proc.Nati.Acad.Sci.USA

Vol.85,pp.7753-7757,October1988

MedicalSciences。

第二参考文章名称为：SalmonellaVirulencePlasmid:ModularAcquisitionof thespvVirulenceRegionbyanF-PlasmidinSalmonellaentericaSubspeciesI andInsertionIntotheChromosomeofSubspeciesII,IIIa,IVandVIIIsolates

第二参考文章作者为：E.FidelmaBoydandDanielL.Hartl

第二参考文章期刊名和时间为：Copyrightó1998bytheGeneticsSocietyof America。