[发明专利]大蒜素抗菌效果的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，尤其是涉及到一种大蒜素抗菌效果的检测方法和最低抑菌浓度的确定。

背景技术

大蒜素是从大蒜的球形鳞茎中提取的挥发性的油状物质，有强烈的刺激味和辛辣味。大蒜具有很强的抑菌和杀菌作用,对多种致病菌,如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌等均有明显抑制和杀灭作用，大蒜还含有丰富的有机营养成分,具有改善饲料适口性、促进食欲、健胃杀菌、驱虫保健、促进生长、改善动物产品肉质等特点。此外,大蒜在动物体内无残留,无耐药性,无致畸、致癌、致突变等不良反应。因此,大蒜素是饲料生产中抗菌素的理想替代品，且使用剂量较低，价格较低，因此在饲料生产中得到了广泛的应用。饲料微生物检测方法是饲料质量管理必不可少的重要组成部分，一般是贯彻“预防为主”的方针，通过该检测可以有效的保障饲料的卫生安全，是权衡饲料质量的重要指标之一。通过微生物检测，能够对饲料的细菌污染程度做出正确评价，为各项卫生管理提供科学依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种大蒜素抗菌效果的检测方法。

1.材料

所需培养基：营养肉汤、营养琼脂、稀松的营养琼脂（含0.15%琼脂的营肉汤）、0.9%氯化钠溶液。

对照品：大蒜素标准品。

样品：大蒜素粉末。

菌种：大肠埃希菌。

试剂：0.1%浓度刃天青指示剂、麦氏比浊管。

用具：灭菌的小试管，96孔板，5ml、2ml、1ml移液枪，灭菌的5ml、2ml、1ml枪头。

2.仪器设备

电子天平，冰箱，37℃培养箱，生物安全柜，真空脉动灭菌柜。

3.实验方法

用接种环蘸取大肠埃希菌菌种在营养琼脂平板划线,在37℃培养18～24h，刮取少量培养物于0.9%氯化钠溶液中，摇匀，与麦氏比浊管对比，稀释，直至浊度与0.5管号浊度（麦氏比浊管）一致。

吸取100μL上述稀释液接种至10ml营养肉汤中，37℃培养18h，接种50μL培养肉汤至10ml稀松的营养琼脂中作为大肠埃希菌的起始培养物。

取大蒜素适量，加稀松的营养琼脂制成浓度为0.5%的供试品溶液，依次稀释，浓度分别为0.25%、0.125%、0.0625%、0.03125%、0.016%、0.008%。

分别取850μL起始培养物，50μL指示剂，和各个浓度100μL供试品溶液，分别混匀，作为供试液。

取850μL起始接种物，50μL指示剂，和100μL20mg/ml的蒜素溶液，混匀，作为阳性对照。

取850μL起始接种物，50μL指示剂，和100μL稀松的营养琼脂，混匀，作为阴性对照。

取200μL稀松的营养琼脂，100μL指示剂，混匀，作为空白对照。

转移200μL供试液至96孔板，每个稀释度加2个孔；37℃培养3h，观察培养过程中的颜色变化。

具体实施方式

第一实施例：

来源于临沂万德福食品有限公司的1%的大蒜素的抑菌效果的检测。

第一步：稀松的营养琼脂的制备：称取0.3g琼脂溶于200ml营养肉汤中，制成0.15%琼脂的营养肉汤。

第二步：本发明所用的培养基（营养肉汤、营养琼脂、稀松的营养琼脂（含0.15%琼脂的营养肉汤）、0.9%氯化钠溶液）使用前在真空脉动灭菌柜中121℃灭菌15分钟，所有用具（试管，96孔板，5ml、2ml、1ml移液枪，5ml、2ml、1ml枪头）在真空脉动灭菌柜中121℃灭菌30分钟。

第三步：对照品的制备：称取大蒜素标准品（来源：北京北纳创联生物技术研究院）约20mg，溶于1ml稀松的营养琼脂中，制成约20mg/ml的对照品溶液。

第四步：样品的制备：称取原料大蒜素0.25g，溶于50ml稀松的营养琼脂中，制成0.5%的样品溶液，依次稀释，制成浓度分别为0.25%、0.125%、0.0625%、0.03125%、0.016%、0.008%。

第五步：实验过程：用接种环蘸取大肠埃希菌菌种在营养琼脂平板划线,在37℃培养18～24h，刮取少量培养物于0.9%氯化钠溶液中，摇匀，与麦氏比浊管对比，稀释，直至浊度与0.5管号浊度（麦氏比浊管）一致。

吸取100μL上述稀释液，接种至10ml营养肉汤中，37℃培养18h，接种50μL培养肉汤至10ml稀松的营养琼脂中作为大肠埃希菌的起始培养物。