[发明专利]结直肠癌循环肿瘤细胞鉴定试剂盒

权利要求书

1.一种结直肠癌循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，包括针对每种标志基因mRNA的捕获探针、扩增探针和标记探针，所述标志基因mRNA包括有以下三类：选自CEA、Survivin、MAP2K6、PTPN11中的至少两种的结直肠癌细胞标志基因mRNA，选自EpCAM、CDH1、KRT17、KRT19、KRT20中的至少一种的上皮细胞标志基因mRNA，选自SNAI1、CTNNB1、FN1、TWIST1中的至少一种的间质细胞标志基因mRNA；其中，

所述捕获探针连接标志基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：与待检测的标志基因mRNA结合的特异性序列P1、间隔臂序列、P2序列，所述P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P4和标志基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列，针对同一类别的标志基因的捕获探针的P2序列相同；

每条扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与相应捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P2、P3和总mRNA之间均不存在特异性结合的序列；

每条标记探针具有与相应扩增探针P4序列互补配对的P5序列，且末端修饰有荧光基团，不同细胞种类标志基因的荧光基团互不相同。

2.根据权利要求1所述的结直肠癌循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，所述标志基因mRNA还包括有针对白细胞标志基因的mRNA的一类，所述白细胞标志基因为CD45。

3.根据权利要求1所述的结直肠癌循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，所述结直肠癌细胞标志基因的捕获探针中：针对CEA基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10中的2条或2条以上，针对Survivin基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.11～SEQ ID NO.20中的2条或2条以上，针对MAP2K6基因特异性序列P1的选自SEQ ID NO.21～SEQ ID NO.30中的2条或2条以上，针对PTPN11基因特异性序列P1的选自SEQ ID NO.31～SEQ ID NO.40中的2条或2条以上；针对结直肠癌细胞标志基因的捕获探针的特异性序列P2为SEQ ID NO.141；所述结直肠癌细胞标志基因mRNA扩增探针中，P3序列为SEQ ID NO.145，P4序列为SEQ ID NO.149。

4.根据权利要求1所述的结直肠癌循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，所述上皮细胞标志基因的捕获探针中：针对EpCAM基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.41～SEQ ID NO.50中的2条或2条以上，针对CDH1基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.51～SEQ ID NO.60中的2条或2条以上，针对KRT17基因特异性序列P1的选自SEQ ID NO.61～SEQ ID NO.70中的2条或2条以上，针对KRT19基因特异性序列P1的选自SEQ ID NO.71～SEQ ID NO.80中的2条或2条以上，针对KRT20基因特异性序列P1的选自SEQ ID NO.81～SEQ ID NO.90中的2条或2条以 上；针对上皮细胞标志基因的捕获探针的特异性序列P2为SEQ ID NO.142；所述上皮细胞标志基因mRNA扩增探针中，P3序列为SEQ ID NO.146，P4序列为SEQ ID NO.150。

5.根据权利要求1所述的结直肠癌循环肿瘤细胞鉴定试剂盒，其特征在于，所述间质细胞标志基因的捕获探针中：针对SNAI1基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.91～SEQ ID NO.100中的2条或2条以上，针对CTNNB1基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.101～SEQ ID NO.110中的2条或2条以上，针对FN1基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.111～SEQ ID NO.120中的2条或2条以上，针对TWIST1基因的特异性序列P1选自SEQ ID NO.121～SEQ ID NO.130中的2条或2条以上；针对间质细胞标志基因的捕获探针的特异性序列P2为SEQ ID NO.143；所述间质细胞标志基因mRNA扩增探针中，P3序列为SEQ ID NO.147，P4序列为SEQ ID NO.151。