[发明专利]一种人工合成的Bt抗虫基因FLIa及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201510917151.8 | 申请日： | 2015-12-11 |
| 公开（公告）号： | CN105349555A | 公开（公告）日： | 2016-02-24 |
| 发明（设计）人： | 郝东云;刘相国;李楠;韩四平;尹悦佳;柳青;刘洋;康领生;王阳;闫玮玉 | 申请（专利权）人： | 吉林省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/32 | 分类号： | C12N15/32;C12N15/82;C12N15/10;C07K14/325;A01H5/00 |
| 代理公司： | 长春菁华专利商标代理事务所 22210 | 代理人： | 于晓庆 |
| 地址： | 130033 吉林省*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 人工合成 bt 基因 flia 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种人工合成的Bt抗虫基因FLIa，其特征在于，该基因的核苷酸序列如序列表中的SEQIDNO:1所示。
2.如权利要求1所述的一种人工合成的Bt抗虫基因FLIa编码的蛋白，其特征在于，该蛋白的氨基酸序列如序列表中的SEQIDNO:2所示。
3.植物表达载体pTF101.1-ubi-FLIa，其特征在于，该载体含有人工合成的Bt抗虫基因FLIa，该载体的核苷酸序列如序列表中的SEQIDNO:3所示。
4.根据权利要求3所述的植物表达载体pTF101.1-ubi-FLIa，其特征在于，用EcoRI和HindIII酶切植物表达载体pCAMBIA3300，回收酶切位点间的片段ubi-nos，连入植物表达载体pTF101.1的EcoRI和HindIII位点间，构建植物表达载体pTF101.1-ubi；将人工合成的两端带有SmaI和SacI酶切位点的Bt抗虫基因FLIa，连入植物表达载体pTF101.1-ubi的SmaI和SacI位点间，构建抗虫基因FLIa的植物表达载体pTF101.1-ubi-FLIa，其核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。
5.根据权利要求3或4所述的植物表达载体pTF101.1-ubi-FLIa，其特征在于，该载体包括：P35S启动子、TEV增强子、bar基因、大豆贮藏蛋白基因vsp终止子、玉米ubi启动子、FLIa基因和根癌农杆菌胭脂碱合成酶基因nos终止子。
6.制备权利要求1所述的人工合成的Bt抗虫基因FLIa的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、将抗虫基因Cry1Ab的DomainⅠ和DomainⅡ与抗虫基因Cry1Ia的DomainⅢ进行交换融合，获得重组抗虫基因MCry1I；
步骤二、在重组抗虫基因MCry1I的基础上，在3’端连入抗虫基因Cry1Ja1的碳末端，得到重组抗虫基因FLMCry1Ia；
步骤三、对重组抗虫基因FLMCry1Ia进行密码子改造，获得Bt抗虫基因FLIa，其核苷酸序列如序列表中的SEQIDNO:1所示。
7.根据权利要求6所述的人工合成的Bt抗虫基因FLIa的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述重组抗虫基因FLMCry1Ia与Cry基因氨基酸序列最大同源性为88％。
8.根据权利要求6所述的人工合成的Bt抗虫基因FLIa的制备方法，其特征在于，步骤三中，对重组抗虫基因FLMCry1Ia进行密码子改造包括：基因编码框优化、消除稀有密码子而利用最佳化密码子、二级结构最小化、调整GC含量。
9.一种提高转基因植物抗虫性的方法，其特征在于，将人工合成的Bt抗虫基因FLIa转化植物中，提高转化植物的抗虫性。
10.一种人工合成的Bt抗虫基因FLIa在提高转基因植物抗虫性中的应用。
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