[发明专利]马钱子抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制品加工技术领域，具体涉及一种马钱子抗肿瘤活性组分的提取方法，以及该活性组分在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

肿瘤是一种基因病，但并非是遗传的，它是指细胞在致癌因素作用下，基因发生了改变，失去对其生长的正常调控，导致单克隆性异常增生而形成的新生物。2008年，WHO发布的数据显示，中国已经成为世界第二大癌症高发国，中国每年新增220万名癌症患者，约占全球癌症病人总数的20％，尤其是肝癌、胃癌和肺癌成为主要的健康杀手。研究如何消灭癌症、让癌症病人能生活地更好，是医药领域中的研究重点，因此寻找高效、低毒、选择性强的有临床应用价值的理想的新型抗肿瘤药物是一项长期而艰巨的任务，从中药里寻找抗肿瘤药物已成为抗肿瘤药物开发的重要方向与希望所在。

马钱子为马钱科植物马钱Strychosrux-vomicaL.的成熟种子，主产于印度、泰国和我国云南等地，具有消肿散结、通络止痛之功效，擅于消瘀除积、通窍利络、畅旺血行。

肿瘤是阴毒之邪瘀结于内，马钱子为辛温大毒之品，善入经络，有攻坚蚀疮、破瘀散结、消肿止痛之功，多用于攻毒祛邪之法。千百年来，马钱子一直作为“以毒攻毒治疗恶性肿瘤的常用药物，研究表明，马钱子对胃癌、食管癌、大肠癌效果显著。故本研究对马钱子的抗肝癌、肺癌活性成分进行一定的研究。

马钱子具有多种与抗肿瘤作用相关的活性物质，有些活性物质如番木鳖碱、马钱子碱的药理作用已研究得比较深入；而其中一些生物碱如番木鳖碱氮氧化物、依卡精、克鲁勃林、奴弗新的研究则较少。马钱子活性物质未能最大程度地得到开发与利用，所以研究具有抗肿瘤作用的新的活性物质，不断开拓现有活性物质的新的生理活性和药理作用具有重要意义，能为进一步研究和开发马钱子在医药方面的应用提供理论基础和产业化背景。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对以上现有背景，提供一种马钱子抗肿瘤活性组分的提取方法，该方法以生物活性实验指导下，马钱子抗癌活性组分分离提取为基础，经乙醇浸提后再用制备液相色谱技术活性导向分离出强活性抗肿瘤活性组分。

本发明所采用的技术方案为：

一种马钱子抗肿瘤活性组分的提取方法，该方法包括以下步骤：

(1)以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后，用乙醇浸泡或者回流提取，过滤，所得滤液进行旋转蒸发至干，用甲醇体积分数为50-70％的甲醇-水二元混合溶剂溶解，得到固含量50-200mg/mL的提取液；

(2)对得到的提取液进行一维液相色谱分离：采用的色谱柱为C18色谱柱，流动相为二元混合液相，其中A相为水、B相为甲醇；进样量为50-200mL/针；流动相流速为100-1000mL/min；检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm；洗脱方式为B相浓度25％等度洗脱10min、B相浓度35％等度洗脱20min、B相浓度100％等度洗脱10min；根据紫外吸收光谱收集15.5-19.5min洗脱液，旋转蒸发至干，得到一维液相组分；

(3)用甲醇体积分数为50-70％的甲醇-水二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至固含量为50-100mg/mL；

(4)进行二维液相色谱分离：采用的色谱柱为C18色谱柱，流动相为二元混合液相，其中A相为水、B相为甲醇；进样量为500-2000μL/针；流动相流速为10-30mL/min；检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm；洗脱方式为B相浓度32％等度洗脱30-40min；根据紫外吸收光谱收集20-31min洗脱液，旋转蒸发浓缩至干，得本发明抗肿瘤活性组分。

所述步骤(1)中回流提取可重复进行1-3次，每次1-2h。

所述步骤(1)、(3)中甲醇-水二元混合溶剂含0.1％(质量百分比)乙酸。

所述步骤(2)、(4)中二元混合液相的A相含0.1％(质量百分比)乙酸。

所述步骤(2)中C18色谱柱具体为反相C18轴向加压色谱柱使用时柱温为室温或25-40℃。

所述步骤(4)中C18色谱柱具体为华谱C18色谱柱使用时柱温为室温或25-40℃。

本发明进一步提供上述提取得到的马钱子抗肿瘤活性组分在制备抗肺癌药物中的应用。该马钱子抗肿瘤活性组分作为有效成分，按常规方法如口服、注射，与药学上的可接受载体或赋形剂，制成适合口服、注射等给药方式的剂型，如：片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片、注射剂、软膏剂、栓剂、吸入剂等多种剂型。