[发明专利]从马钱子中提取番木鳖碱氮氧化物的方法及其应用

说明书

本发明提供一种从马钱子中提取番木鳖碱氮氧化物的方法，包括以下步骤：马钱子磨粉状后用乙醇浸泡或回流提取，滤液蒸干用甲醇‑水溶液溶解；进行一维液相分离，采用C18色谱柱，A相水、B相甲醇二元液相，洗脱方式为B相25％等度洗脱10min、B相35％等度洗脱20min、B相100％等度洗脱10min，收集11.5‑13.5min洗脱液，蒸干再用甲醇‑水溶液溶解；二维液相分离，采用C18色谱柱，A相水、B相甲醇二元液相，洗脱方式为B相30％等度洗脱15‑30min，收集9.7‑10.5min洗脱液，蒸干得番木鳖碱氮氧化物单体化合物。该方法分离出具较强抗肿瘤活性的单体化合物，可用于制备抗肿瘤药物中。

技术领域

本发明涉及中药提取技术领域，具体涉及一种从马钱子中提取番木鳖碱氮氧化物的方法，以及该化合物制备抗肝癌、抗肺癌药物中的应用。

背景技术

番木鳖碱氮氧化物是中药马钱子中的一种有抗癌活性的化合物，结构式如下所示：

现今对番木鳖碱氮氧化物的分离提取受传统中药非机械化的操作方式所限制，步骤繁琐，耗时，耗力，得到的化合物量少且批次间差异大，难以进行临床研究。

另外对于番木鳖碱氮氧化物而言，它的应用也很少有人研究，因此其潜在作用有待开发。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对以上现有技术问题，提供一种从中药马钱子中提取番木鳖碱氮氧化物的方法，该方法采用高效液相色谱进行分离纯化，分离方法稳定，重复性高，制备量大，操作简单省时。

本发明所采用的技术方案为：

一种从马钱子中提取番木鳖碱氮氧化物的方法，该方法包括以下步骤：

(1)以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后，用乙醇浸泡或者回流提取，过滤，所得滤液进行旋转蒸发至干，用甲醇体积分数为50-70％的甲醇-水二元混合溶剂溶解，得到固含量50-200mg/mL的提取液；

(2)对得到的提取液进行一维液相色谱分离：采用的色谱柱为C18色谱柱，流动相为二元混合液相，其中A相为水、B相为甲醇；进样量为50-200mL/针；流动相流速为100-1000mL/min；检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm；洗脱方式为B相浓度25％等度洗脱10min、B相浓度35％等度洗脱20min、B相浓度100％等度洗脱10min；根据紫外吸收光谱收集11.5-13.5min洗脱液，旋转蒸发至干，得到一维液相组分；

(3)用甲醇体积分数为50-70％的甲醇-水二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至固含量为50-100mg/mL；

(4)进行二维液相色谱分离：采用的色谱柱为C18色谱柱，流动相为二元混合液相，其中A相为水、B相为甲醇；进样量为500-2000μL/针；流动相流速为10-30mL/min；检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm；洗脱方式为B相浓度30％等度洗脱15-30min；根据紫外吸收光谱收集9.7-10.5min洗脱液，旋转蒸发浓缩至干，得本发明化合物番木鳖碱氮氧化物。

所述步骤(1)中回流提取可重复进行1-3次，每次1-2h。

所述步骤(1)、(3)中甲醇-水二元混合溶剂含0.1％(质量百分比)乙酸。

所述步骤(2)、(4)中二元混合液相的A相含0.1％(质量百分比)乙酸。

所述步骤(2)中C18色谱柱具体为反相C18轴向加压色谱柱(150×250mm，10μm，)，使用时柱温为室温或25-40℃。

所述步骤(4)中C18色谱柱具体为华谱C18色谱柱(20×250mm，5μm，)，使用时柱温为室温或25-40℃。