[发明专利]一种用于PCR扩增的丝状真菌DNA的提取方法

权利要求书

1.一种用于PCR扩增的丝状真菌DNA的提取方法，其特征在于，所述用于PCR扩增的丝状真菌DNA的提取方法包括：

菌种培养，将所筛选的菌种接种在PDA液体培养基中，28℃震荡培养48h；

吸取1ml菌液到无菌EP管中，常温下10000r/min离心5min；

弃去上清液，将沉淀重悬于0.8ml生理盐水中8000r/min离心5min；

弃去上清液，向EP管内加入6000μL2×CTAB提取缓冲液混合，再加入1g玻璃珠，于振荡器上震荡10min；

65℃下水浴30min-40min；

加6000μL的氯仿/异戊醇混合液摇匀，常温下10000r离心5min，氯仿/异戊醇混合液体积比为24：1；

移取上清液至Eppendorf管中，加等体积的氯仿/异戊醇混合液，常温下10000r离心5min，氯仿/异戊醇混合液体积比为24：1；

取上清液，加入6000μL冰冻乙醇，静置30min；

常温下10000r/min离心10min；

弃上清液，用70％的乙醇洗2-3次，晾干，加6000μLTE缓冲液充分溶解后在-20℃下保存备用。

2.如权利要求1所述的用于PCR扩增的丝状真菌DNA的提取方法，其特征在于，所述2×CTAB提取缓冲液含0.7mol/LNaCL，100mmol/LTris-HCLpH8.0，20mmol/LEDTA，20g/LCTAB。

3.如权利要求1所述的用于PCR扩增的丝状真菌DNA的提取方法，其特征在于，所述TE缓冲液含10mmol/LTris-HC11mmol/LEDTApH8.0。

4.一种使用权利要求1-3任意一项所述用于PCR扩增的丝状真菌DNA的提取方法的紫薇内生真菌DNA的提取方法，其特征在于，所述紫薇内生真菌DNA的提取方法包括：

菌种培养：将所筛选的紫薇内生真菌接种在PDA液体培养基中，28℃震荡培养48h；

吸取1ml菌液到无菌EP管中，常温下10000r/min离心5min；

弃去上清液，将沉淀重悬于0.8ml生理盐水中8000r/min离心5min；

弃去上清液，向EP管内加入6000μL2×CTAB提取缓冲液混合，再加入1g玻璃珠，于振荡器上震荡10min；

65℃下水浴30min-40min；

加6000μL的氯仿/异戊醇混合液摇匀，常温下10000r离心5min，氯仿/异戊醇混合液体积比为24：1；

移取上清液至Eppendorf管中，加等体积的氯仿/异戊醇混合液，常温下10000r离心5min，氯仿/异戊醇混合液体积比为24：1；

取上清液，加入6000μL冰冻乙醇，静置30min；

常温下10000r/min离心10min；

弃上清液，用70％的乙醇洗2-3次，晾干，加6000μLTE缓冲液充分溶解后在-20℃下保存备用。

5.一种使用权利要求1-3任意一项所述用于PCR扩增的丝状真菌DNA的提取方法的白酒丝状真菌DNA的提取方法，其特征在于，所述白酒丝状真菌DNA的提取方法包括：

菌种培养：将所筛选的白酒丝状真菌接种在PDA液体培养基中，28℃震荡培养48h；

吸取1ml菌液到无菌EP管中，常温下10000r/min离心5min；

弃去上清液，将沉淀重悬于0.8ml生理盐水中8000r/min离心5min；

弃去上清液，向EP管内加入6000μL2×CTAB提取缓冲液混合，再加入1g玻璃珠，于振荡器上震荡10min；

65℃下水浴30min-40min；

加6000μL的氯仿/异戊醇混合液摇匀，常温下10000r离心5min，氯仿/异戊醇混合液体积比为24：1；

移取上清液至Eppendorf管中，加等体积的氯仿/异戊醇混合液，常温下10000r离心5min，氯仿/异戊醇混合液体积比为24：1；

取上清液，加入6000μL冰冻乙醇，静置30min；

常温下10000r/min离心10min；

弃上清液，用70％的乙醇洗2-3次，晾干，加6000μLTE缓冲液充分溶解后在-20℃下保存备用。